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目的:1、研究vaspin对棕榈酸诱导的INS-1胰岛β细胞的胰岛素抵抗和胰岛炎症的分子机制;2、研究vaspin是否可通过PI3K/Akt胰岛素信号通路和NF-κB炎症信号通路影响INS-1细胞的功能。方法:为了探讨vaspin对PI3K/Akt和NF-κB信号通路的影响以及确定合适的vaspin浓度,以INS-1细胞为研究对象分为5组:(1)对照组:完全培养基培养,不加干预因素;(2)PA(棕榈酸)组:0.5 mmol/l棕榈酸培养;(3)PA+vaspin(80 ng/ml)组:0.5 mmol/l棕榈酸+80 ng/ml的vaspin培养;(4)PA+vaspin(160 ng/ml)组:0.5 mmol/l棕榈酸+160 ng/ml的vaspin培养;(5)PA+vaspin(320 ng/ml)组:0.5 mmol/l棕榈酸+320 ng/ml的vaspin培养。Real-Time PCR检测上述5组细胞IRS-1、IRS-2、Akt、NF-κB的m RNA表达水平;Western blot检测IRS-2、p IRS-2、Akt、p Akt、NF-κB P65蛋白的表达水平。确定vaspin的合适浓度为320 ng/ml后,为了观察vaspin是否可通过激活PI3K/Akt信号通路介导INS-1细胞的分泌功能,实验分为3组:(1)对照组:0.5 mmol/l棕榈酸培养;(2)vaspin组:0.5 mmol/l棕榈酸+320 ng/ml的vaspin培养;(3)vaspin+ly294002(PI3K抑制剂)组:0.5 mmol/l棕榈酸+320 ng/ml的vaspin培养+25μmol/l的PI3K抑制剂ly294002培养。为了观察vaspin是否可通过抑制NF-κB信号通路介导INS-1细胞的分泌功能,以INS-1细胞为研究对象,并分为3组:(1)对照组:0.5 mmol/l棕榈酸培养;(2)vaspin组:0.5 mmol/l棕榈酸+320 ng/ml的vaspin培养;(3)TPCK(NF-кB抑制剂)组:作为阳性对照,0.5 mmol/l棕榈酸+20μmol/l的NF-кB抑制剂TPCK培养。Real-Time PCR检测上述分组细胞Akt、NF-κB的m RNA表达水平;Western blot检测Akt、p Akt、NF-κB P65蛋白的表达水平。ELISA检测葡萄糖刺激的胰岛β细胞分泌胰岛素的水平。结果:1.Vaspin对PI3K/Akt和NF-κB信号通路的影响与对照组相比,PA组IRS-2 m RNA、总的IRS-2蛋白、Akt的磷酸化水平(p Akt)和p Akt/Akt比例明显降低(P<0.05),NF-κB m RNA、NF-κB P65蛋白、IRS-2的磷酸化水平(p IRS-2)、p IRS-2/总IRS-2蛋白的比例明显增高(P<0.05)。和PA组相比,PA+vaspin(80 ng/ml)组、PA+vaspin(160 ng/ml)组、PA+vaspin(320 ng/ml)组使IRS-2 m RNA、总的IRS-2蛋白、p Akt和p Akt/Akt的比例明显上调和增高(P<0.05);NF-κB m RNA、NF-κB P65蛋白、p IRS-2和p IRS-2/总IRS-2蛋白的比例明显降低(P<0.05)。2.Vaspin对PI3K/Akt信号通路介导的INS-1胰岛β细胞功能的影响与对照组相比,vaspin组INS-1细胞p Akt/Akt的比例和葡萄糖刺激的INS-1细胞分泌的胰岛素水平明显增高(P<0.05)。而vaspin+ly294002(PI3K抑制剂)组和vaspin组相比,p Akt/Akt的比例和葡萄糖刺激的INS-1细胞分泌的胰岛素水平下降(P<0.05)。3.Vaspin对NF-κB信号通路介导的INS-1胰岛β细胞功能的影响与对照组相比,vaspin组和TPCK(NF-кB抑制剂)组INS-1细胞NF-κB m RNA和NF-κB P65蛋白的水平下调(P<0.05),葡萄糖刺激的INS-1细胞分泌的胰岛素水平明显增高(P<0.05)。与vaspin组相比,TPCK组NF-κB m RNA和NF-κB P65蛋白的水平增高(P<0.05),葡萄糖刺激的INS-1细胞分泌的胰岛素水平下降(P<0.05)。结论:棕榈酸可诱导胰岛β细胞产生胰岛素抵抗和炎症,vaspin激活PI3K/Akt信号通路和抑制NF-κB信号通路改善棕榈酸诱导的胰岛β细胞胰岛素抵抗和抑制胰岛β细胞炎症,并改善葡萄糖刺激的胰岛β细胞的分泌功能。本课题为国家自然科学基金“Vaspin在胰岛β细胞炎症、胰岛素抵抗及氧化应激中的作用及机制研究(编号:81471025)”。