安徽茜草属植物系统鉴定及质量评价研究

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目的:1.对安徽茜草属植物进行资源调查,为合肥华润神鹿药业有限公司儿泻停产品中茜草藤原料寻找本地资源。2.对安徽茜草属三种植物进行鉴别研究,建立基原鉴别、性状鉴别、理化鉴别、显微鉴别和DNA条形码鉴别等方法相结合的系统鉴定体系;对茜草药材以指标性成分进行定量评价,建立药材质量评价体系;为茜草属植物的分类、鉴别以及开发利用提供科学的依据。方法:1.通过野外调查、标本采集以及标本鉴定,掌握安徽茜草属植物的种类以及资源分布状况。2.运用植物形态、生药性状、薄层检识、显微鉴别和DNA条形码鉴别等方法,对安徽茜草属三种植物进行系统鉴定。3.根据显色剂显色反应原理,对茜草根中的蒽醌类成分进行组织化学定位研究。4.应用高效液相色谱法测定安徽茜草属植物的根及根茎,市售茜草药材以及茜草根的木质部和韧皮部中的大叶茜草素和羟基茜草素的含量。结果:1.安徽茜草属植物共有三种,分别为茜草、东南茜草和金剑草,分布区域广泛。茜草主要分布在皖北平原地区以及江淮丘陵一带,东南茜草主要分布在大别山区、沿江丘陵以及皖南山区,金剑草主要分布在大别山区和沿江丘陵。2.三种植物在植物形态、生药性状、薄层检识以及显微特征上有一定差异。茜草的叶片一对较大,一对较小,金剑草的叶片狭长呈披针形;茜草的成熟果实为桔红色,果皮与种子易分离;茜草根的木质部占整个根的直径比例约为2/3,金剑草的约为1/3,东南茜草的约为1/2,三者木质部所占比例的大小关系为茜草>东南茜草>金剑草;薄层检识结果为,三种植物的地上部分都含有黄酮类成分,根及根茎都含有大叶茜草素;在粉末特征上,茜草的非腺毛有两种,其中一种为分枝状非腺毛;微性状观察结果显示,茜草茎上的非腺毛有两种,一种呈鹰嘴状弯曲,另一种呈钩状。对19个样本进行DNA提取、PCR以及双链测序,测序成功率ITS为78.9%(15)和psb A-trn H为100%(19),选定以ITS+psb A-trn H的组合序列构建DNA条形码NJ系统发育树,直观的表现出茜草属植物之间的亲缘关系和系统发育,该组合序列可以用来鉴别茜草属植物以及茜草药材的来源。3.蒽醌类成分的组织化学定位研究表明,茜草根中的蒽醌类成分主要积累在韧皮部。4.高效液相色谱法测定茜草药材中大叶茜草素和羟基茜草素两种指标性成分的含量,色谱条件成熟,色谱峰的峰形较好,理论塔板数、拖尾因子以及分离度均符合要求。大叶茜草素在0.0010~0.216mg/ml,羟基茜草素在0.0016~0.2005mg/ml范围内与峰面积线性关系良好。茜草和金剑草的根及根茎中的指标性成分均符合《中国药典》规定;市售茜草药材指标性成分含量测定中,陕西和河北各有一份样品不符合标准,合格的样品中大叶茜草素含量差异较大,茜草药材质量参差不齐;茜草根的韧皮部中大叶茜草素和羟基茜草素的含量均高于木质部的含量。结论:1.通过对安徽茜草属植物资源调查,寻找到了合肥华润神鹿药业有限公司儿泻停产品中茜草藤原料的本地资源,降低了企业的生产成本。2.基原鉴别、性状鉴别、理化鉴别、显微鉴别和DNA条形码鉴别可用于安徽茜草属植物的系统鉴定,为该属植物的准确、快速鉴别提供新的方法。同时为合肥华润神鹿药业有限公司儿泻停产品制定企业质量标准提供参考。3.HPLC对茜草药材的指标性成分进行测定,测定结果表明,金剑草的根及根茎中的指标性成分也符合《中国药典》要求,建议今后在对其药效等方面研究的基础上作为茜草药材的替代品使用;市场上流通的茜草药材面临较大的质量问题,药材来源不单一,同属植物的根均做药材出售;蒽醌类成分主要积累在茜草根的韧皮部,为今后茜草中蒽醌类成分的开发利用提供依据。
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