论文部分内容阅读
目的:作为国内最常见消化系统恶性肿瘤中的一种,胃癌早期发现的不易导致临床病例往往处于进展期,伴有局部或远处转移,影响预后。化疗被纳入挽救胃癌病人生命有效疗法,可是多药耐药(multidrug resistance,MDR)致使部分病例失去疗效,为造成较高死亡率众因素之一。MDR为肿瘤细胞对某一特定药物及其他分子布局、起效途径不同的化疗药均表现耐药。它包括原发性和继发性耐药,前者指在化疗开始即对多种药物不敏感;后者指在开始化疗时有良好效果,接受一段时间的用药后对所用药物出现耐药性。MDR产生的机制复杂,是多基因、多途径综合调控的结果。Pokemon(POK erythroid myeloid ontogenic factor),POK红系髓性致癌因子,属于转录抑制因子POK家族,在胚胎生长、分化及癌形成历程起重要影响。研究表明Pokemon既能调控肿瘤细胞生长,还能通过多种机制对某些癌基因和抑癌基因进行调控,从而被称为肿瘤总开关。目前虽有资料表明Pokemon与多种恶性肿瘤发生、发展息息相关,但对它是否参与肿瘤多药耐药并不肯定。本课题以胃癌及相应转移淋巴结为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q PCR)以及免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(streptavidin-perosidase,SP)法检测Pokemon及四种肿瘤耐药相关因子mRNA及蛋白表达情况,并行噻唑蓝[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]药敏性实验,探索Pokemon与肿瘤耐药相关蛋白以及Pokemon与化疗药敏性的关系,为临床治疗提供新的理论基础。方法:取40例进展期胃癌病人原发灶及对应转移淋巴结新鲜标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应和免疫组织化学SP法检验Pokemon在原发灶及转移淋巴结的表达;选取免疫组化SP法检验胃癌原发灶与转移淋巴结中P-糖蛋白(p-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白-1(multidrug resistance associated protein-1,MRP-1)、谷胱甘肽-S-转移酶-π(glutathione-S-transferase-π,GST-π)、胸苷酸合酶(thymidylatesynthase,TS)的表达;采用mtt法检测5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-fu)、长春新碱(vincristine,VCR)、紫杉醇(paclitaxel,PTX)、奥沙利铂(OXAliplatin,OXA)影响胃癌原发灶与转移淋巴结细胞体外抑制情况;分析Pokemon和肿瘤耐药相关因子以及Pokemon和化疗药敏性之间联系。全部数据使用SPSS 19.0软件解析,P<0.05具统计学意义。结果:1 胃癌及转移淋巴结中Pokemon的表达免疫组织化学结果显示,Pokemon蛋白在胃癌原发灶和转移淋巴结高表达率分别是65%、70%,此差别无显著性(P>0.05)。相关性分析表明,Pokemon蛋白于胃癌原发灶与淋巴结两部位间表达无明显相关性(r=-0.128,P>0.05)。荧光定量pcr结果显示胃癌原发灶和转移淋巴结里Pokemon mRNA相对表达量分别是0.196±0.375、0.098±0.071,经wilcoxon符号秩检验,差异无统计学意义(Z=-0.282,P=0.778)。经相关分析,Pokemonmrna表达于胃癌原发灶和转移淋巴结两部位间没有明显相关关系(r=0.077,P=0.637)。2 胃癌及转移淋巴结中P-gp、MRP-1、GST-π、TS蛋白的表达免疫组化结果表明,P-gp、MRP-1和TS蛋白在转移淋巴结表达显著高于胃癌原发灶(82.5%vs57.5%,75%vs55%,72.5%vs52.5%,均P<0.05);转移淋巴结、原发灶gst-π蛋白表达强度没有显著区别(72.5%vs65%,P>0.05)。相关分析表明P-gp、MRP-1于胃癌原发灶、转移淋巴结两部位间表达分别具有正相关关系(r=0.332,r=0.427,均P<0.05)。3 胃癌及转移淋巴结中Pokemon与P-gp、MRP-1、gst-π、TS的相关性经相关性检测,在胃癌组织,Pokemon分别同P-gp、MRP-1、TS的表达呈现正相关性(r=0.399,r=0.428,r=0.508,均p<0.05);在转移淋巴结,Pokemon与P-gp、MRP-1之间的表达均具有正相关性(r=0.325,r=0.326,均p<0.05)。4 胃癌及转移淋巴结细胞对5-fu、VCR、PTX、OXA化疗药物敏感性比较VCR、OXA作用转移淋巴结细胞的抑制率显著小于原发灶(t=2.056,t=2.481,均P<0.05),5-fu、PTX作用于这两种细胞时抑制率无显著差异(P>0.05)。5 胃癌及转移淋巴结细胞中Pokemon表达与化疗药敏性关系在原发灶中,VCR、PTX作用Pokemon高表达组肿瘤细胞时抑制率显著小于低表达组(t=2.417,t=3.281,均P<0.05);而转移淋巴结,5-Fu、VCR、OXA作用Pokemon高表达组肿瘤细胞时抑制率显著小于低表达组(t=2.071,t=2.220,t=2.558,均P<0.05)。结论:1 Pokemon于胃癌原发灶与转移淋巴结都存在较高阳性表达率,启示Pokemon可能参与了胃癌侵袭转移,可以作为基因治疗的靶点;Pokemon于胃癌原发灶与转移淋巴结的表达间没有相关关系,提示Pokemon在胃癌原发灶与转移淋巴结发挥的作用不同,无明显规律性。2 P-gp、MRP-1、GST-π、TS于胃癌癌组织与转移淋巴结都存在较高的高表达率,提示与胃癌原发性耐药形成存在某种联系;P-gp、MRP-1和TS蛋白在转移淋巴结的表达比原发灶高,表明胃癌原发灶和转移淋巴结存在耐药性差别,转移淋巴结可能更具耐药性。3在胃癌原发灶和转移淋巴结,Pokemon分别与P-gp、MRP-1表达间存在正相关关系,提示Pokemon通过某种机制可以调控P-gp、MRP-1表达,参与了胃癌原发性多药耐药;Pokemon与TS的表达在胃癌原发灶具有正相关性而在淋巴结无相关性,提示Pokemon可能参与了对TS的调控,但出现了异质性改变。4 Pokemon表达仅影响部分化疗药物的敏感程度,提示胃癌多药耐药是多因素网络化作用结果。