B7-H4在人子宫颈癌的表达与T细胞浸润的相关性研究及其对外周血T细胞的免疫调节作用

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目的:研究共刺激分子B7-H4在人子宫颈癌的表达及其与肿瘤内浸润的FOXP3~+、CD4~+T、CD8~+T细胞数量和分泌细胞因子的关系。观察重组人B7-H4蛋白对宫颈癌患者外周血T细胞增殖周期、凋亡及分泌细胞因子的影响。方法:采用SP免疫组织化学染色检测B7-H4在30例正常人宫颈组织、30例高级别CIN(CINII-III)和67例子宫颈癌的表达;免疫荧光双标观察肿瘤内浸润的FOXP3~+、CD4~+T、CD8~+T细胞数量及其TGF-β1和IFN-γ分泌情况。B7-H4与淋巴细胞混合培养48h后,采用流式细胞术分析B7-H4对15例宫颈癌患者外周血中活化的T细胞的细胞周期、凋亡及各亚群T细胞的影响,ELISA芯片检测培养上清液中细胞因子含量。结果:B7-H4不表达于正常人宫颈上皮,仅在部分瘤变宫颈上皮微弱表达;子宫颈癌B7-H4的阳性表达率为46%(31/67),显著高于正常人宫颈上皮和瘤变宫颈上皮(p<0.01,p<0.05);子宫颈癌B7-H4阳性组病灶内浸润的CD8~+T细胞以及分泌IFN-γ的CD8~+T数量显著低于B7-H4阴性组(p<0.001,p<0.035);B7-H4的表达与肿瘤内浸润的FOXP3~+细胞、CD4~+T细胞以及分泌TGF-β1的CD4~+T细胞数量无关(p>0.05,p>0.05)。B7-H4与宫颈癌患者外周血T细胞混合培养48h后,G1、G2和S期T细胞分别占90.59%、8.55%和0.87%,而空白对照组分别占92.83%、6.09%和1.13%;B7-H4使CD4~+T和CD8~+T细胞的Ki67阳性率下降为2.13%±0.13%和1.03%±1.33%,低于空白对照组的Ki67阳性率2.74%±0.98%和1.71%±1.32%;B7-H4使混合培养T细胞CD8~+T和CD4~+T细胞占CD3~+T细胞的比例下降,但CD4~+T/CD8~+T比值增高,而且CD4~+CD25~+Foxp3~+T细胞增多;混合培养上清液中TGF-β1含量为259.25±32.78pg/ml,与空白对照组202.75±20.17pg/ml相比稍高。B7-H4对宫颈癌患者外周血活化T细胞的凋亡无明显影响。结论: B7-H4在人子宫颈癌细胞异常高表达,并与肿瘤内浸润的CD8~+T细胞数量减少以及分泌IFN-γ减少有关,提示B7-H4在抑制肿瘤微环境的细胞免疫中发挥作用。B7-H4使宫颈癌患者外周血活化T细胞被阻滞于G2期,S期细胞明显减少;B7-H4抑制CD4~+T和CD8~+T细胞增殖,但对Foxp3~+T增殖和分泌TGF-β1无明显影响; B7-H4对T细胞凋亡无明显作用。
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