在口腔癌中舌癌是最常见的恶性肿瘤,其发病率一直位居榜首[1]。由于舌体运动频繁,并伴有丰富的淋巴管、神经以及血管,使得舌癌比其它的头颈部肿瘤更易发生局部侵袭及远处转移[2,3]。细胞与细胞间粘附性降低是肿瘤侵袭、转移的关键步骤。在建立和维持细胞间连接,巩固细胞间粘附性的过程中,作为上皮细胞间的粘附分子的钙黏蛋白具有重要作用。至今已有大量文献报道钙黏蛋白与多种肿瘤侵袭、转移存在密切联系,因而本课题对课题组自主构建的舌癌高转移细胞株进行转录组测序并分析,选择差异表达的与肿瘤侵袭、转移密切相关的钙黏蛋白家族基因进行研究。目的在本研究中,我们对自主构建的舌癌高转移细胞株LN2(第二代舌癌细胞高转移株,来源于本课题组裸鼠舌癌正位模型CAL27细胞株经淋巴道转移的体内筛选,转移率25%)、舌癌高转移细胞株LN4(第四代舌癌细胞高转移株,来源于本课题组裸鼠舌癌正位模型CAL27细胞株经淋巴道转移的体内筛选,转移率63%)和CAL27细胞株进行转录组测序并分析存在差异表达的钙黏蛋白超家族基因[4]。据此我们推测存在较大差异表达的钙黏蛋白家族基因可能在舌癌细胞株中起重要作用。因此,我们针对差异表达的钙黏蛋白基因在舌癌细胞株中的作用进行探索,以期为舌癌的早期分子诊断以及靶向治疗提供新思路。方法第一部分:取舌癌细胞株CAL27及本课题组自主构建的舌癌高转移细胞株LN2、LN4进行转录组测序并分析,得到CDH11基因在LN2、LN4高转移细胞株中表达显著降低。为了进一步验证转录组测序结果,运用Real time-PCR检测CAL27、LN4细胞株中m RNA表达水平。第二部分:用慢病毒LV-CDH11感染CAL27、TCA8113舌癌细胞株,构建稳定过表达CDH11细胞株。通过Real time-PCR、蛋白质免疫印迹实验分别验证稳定过表达细胞株中m RNA及蛋白的过表达情况。通过细胞免疫荧光实验观察CDH11在过表达细胞株中表达的位点。第三部分:通过CCK8增殖实验、平板克隆实验、transwell小室实验、肿瘤干细胞成球培养、粘附实验、穿人口腔上皮细胞屏障实验验证过表达CDH11基因对舌癌细胞株CAL27、TCA8113功能的影响。结果第一部分:对课题组前期建立的舌癌高转移细胞株进行转录组测序得出CDH11在舌癌高转移细胞株LN4中表达低于舌癌高转移细胞株LN2;CDH11在舌癌高转移细胞株LN2表达低于CAL27细胞株。CAL27细胞株、舌癌高转移细胞株LN4的Real time-PCR结果显示CDH11在舌癌高转移细胞株LN4中表达低于CAL27细胞株。第二部分:用慢病毒感染舌癌细胞株后,Real time-PCR技术、蛋白质免疫印迹实验结果表明CAL27、TCA8113细胞株过表达组的CDH11的m RNA和蛋白的表达水平均高于空载组。细胞免疫荧光实验证实相对于空载组,过表达组CAL27、TCA8113细胞膜上存在CDH11过表达。第三部分:与空载组相比,过表达组的CCK8增殖实验、平板克隆实验、transwell小室实验、肿瘤干细胞成球培养实验结果差异无统计学意义;而在粘附实验中过表达组粘附能力强于空载组;在穿人口腔上皮细胞屏障实验中过表达组穿过transwell小室的能力弱于空载组。结论CDH11在舌癌高转移细胞株LN2、LN4中表达降低,通过成功构建的稳定过表达CDH11舌癌细胞株证实过表达CDH11对CAL27、TCA8113舌癌细胞株的增殖、迁移、侵袭能力无影响但能增强细胞株的粘附能力,减弱TCA8113细胞穿通人口腔上皮细胞进行迁移的能力。