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肝脏是机体的重要器官,承担着物质代谢和生物转化的功能,血液供应丰富,因此易受到体内外各种致病因素和刺激因子的侵袭,引起肝脏的损伤与炎症反应。肝损伤是由各种肝脏疾病所产生的病变结果。临床上造成急性肝损伤的原因主要有药物服用不当、饮酒过量、误食有毒食物、病毒感染等。肝损伤的发生机制颇为复杂,可分为化学性和免疫性。化学机制主要通过CYP2E1及结合反应产生的中间代谢产物产生损伤,如使线粒体功能失调、改变质膜的完整性、细胞内离子浓度的变化以及自由基作用等;免疫机制则通过细胞因子、一氧化碳、补体及免疫变态反应等产生损伤、病理性细胞凋亡也是其中之一。肝脏长期处于损伤状态,往往会导致肝纤维化的发生。肝纤维化是肝脏对不同病因所致的慢性损害产生的创伤愈合反应,表现为细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)成分的过度增生与异常沉积、肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)过度增殖。肝纤维化是多种慢性肝病向肝硬化发展的中间病理阶段。有研究表明,肝纤维化病变经积极治疗可延缓甚至逆转。目前,各国学者从肝纤维化发生发展的不同环节入手,研制了许多抗纤维化药物,但因种种原因尚未找到十分理想的药物。因此,深入了解肝纤维化分子作用机制,寻找理想的的抗纤维化药物及有关肝纤维化发病机制的阐明,具有重要的理论和临床意义。夏枯草为唇形科夏枯草属植物,性味苦寒,是一种传统的中药,具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等生物活性。其含有多种活性化学成分,主要有三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类等化合物。本实验通过建立化学性急性肝损伤以及肝纤维化动物模型,探讨夏枯草总三萜(total triterpenoid of Prunella vulgaris L., TTP)抗大鼠急性肝损伤及肝纤维化的作用,并通过检测其对肝组织中CYP2E1、p-ERK以及TGF-β/Smad信号转导通路中关键信号传导分子Smad2、Smad3、Smad7表达水平的变化,探讨TTP发挥护肝作用的分子机制。1.夏枯草总三萜对CCL4诱导的急性肝损伤大鼠的作用SD大鼠,各给药组(62.5、125、250mg/kg)和阳性对照组(联苯双酯200mg/kg)预防性给药6天,正常组和模型组分别给予同体积的蒸馏水,灌胃6d。第6天给药1h之后,给药组、模型组和阳性对照组一次性腹腔注射50%四氯化碳(carbontetrachloride,CCL4)0.2ml·100g-1,建立急性肝损伤模型。实验结果显示,与模型组相比,TTP各剂量组可降低急性肝损伤大鼠血清中ALT、AST活性,降低肝匀浆MDA的水平,升高SOD、GSH-Px的水平,抑制肝组织中CYP2E1的表达;同时,病理组织学检查结果显示TTP各剂量组大鼠肝组织病变程度明显减轻。提示TTP对CCL4致大鼠急性肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抗机体脂质过氧化、抑制CYP2E1表达有关。2.夏枯草总三萜对CCL4诱导的肝纤维化大鼠的保护作用给予大鼠50%CCL4皮下注射12周,建立肝纤维化模型,设立正常组、模型组、TTP给药组(25、50、100mg/kg)、秋水仙碱阳性对照组(0.1mg/kg)。于造模第5周时开始灌胃给药,每周2次,至造模结束。结果显示,模型组ALT、AST、HA、PCIII、CIV等纤维化血清学标志物水平相比于正常组有显著升高,给予TTP可使其明显降低,并可明显降低模型组Hyp。组织病理学结果表明TTP可明显抑制肝纤维化程度,改善肝组织结构,减少胶原沉积。提示TTP对CCL4诱导的大鼠肝纤维化具有良好的保护作用。检测肝匀浆氧化应激指标发现,与正常组相比,模型组大鼠肝匀浆中GSH-Px酶和SOD活性显著下降,而MDA含量显著升高。给予TTP后可显著降低升高的MDA值,并升高SOD和GSH-Px酶活性。提示TTP可缓解大鼠肝脏的氧化应激状态。进一步观察TTP对大鼠肝组织中α-SMA、ProcollagenⅠ、Smad2、Smad3、Smad7mRNA的表达含量的影响,RT-PCR检测结果发现TTP可明显降低模型组大鼠肝组织α-SMA、ProcollagenⅠ、Smad2、Smad3含量,升高Smad7含量;并明显降低肝纤维化大鼠ERK1/2磷酸化程度。提示TTP对CCL4诱导的肝纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制TGF-β/Smad信号通路及ERK1/2过磷酸化有关。