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在前期研究的基础上,将泽泻与车前草配伍组方,进行该复方的配伍比例、提取工艺、提取物稳定性以及防治泌尿系草酸钙结石的药效研究。 在明确单味泽泻和单味车前草均能抑制草酸钙晶体生长的基础上,将二者按不同比例组方配伍,以一定浓度的乙醇溶液提取后,运用种晶技术,测定单味药物和各比例配伍复方在体外对CaOx晶体生长的抑制指数。结果表明,泽泻车前草复方醇提物的体外抑晶能力与蒸馏水在统计学上具有显著性差异。确定最佳配伍比例3:5时,抑制指数高达131.77%,抑制草酸钙结晶生长的效果最佳。 选择23-乙酰泽泻醇B和大车前苷作为泽泻车前草复方的指标性成分,建立HPLC含量测定法,考察以 HPLC-ELSD法测定23-乙酰泽泻醇 B含量,以HPLC-UV法测定大车前苷含量的方法学。23-乙酰泽泻醇B在0.059~2.960μg范围内呈良好的线性关系(r2=0.9992),平均回收率为97.76%,RSD=1.79%;大车前苷在0.155~0.931μg范围内呈良好的线性关系(r2=0.9999),平均回收率为97.99%,RSD=1.04%。 在确定泽泻车前草复方配比的基础上,进一步以乙醇为提取溶剂,采用正交试验,以23-乙酰泽泻醇B、大车前苷含量和得率为指标,对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数等影响因素进行考察,确定最佳提取工艺:乙醇浓度为60%,提取次数为两次,乙醇溶液第一次用量为10倍量,第二次用量为8倍量,每次提取时间为1.5h。 按药物稳定性试验的指导原则进行稳定性试验,考察项目为外观、23-乙酰泽泻醇B含量、大车前苷含量以及水分。泽泻车前草复方醇提物粉末较易吸湿,吸湿后易黏结,但含量较稳定。 用乙二醇和1-α(OH)VitD3诱导雄性SD大鼠泌尿系草酸钙结石的形成,设立空白对照组、模型组、阳性对照组以及样品高、中、低剂量组,观察大鼠血液、尿液、组织的相关生化指标及肾组织的病理变化,探讨该提取物对大鼠泌尿系草酸钙结石形成的影响。实验表明,泽泻车前草复方对泌尿系草酸钙结石大鼠的体重、尿量、24h尿液、尿Ca2+含量、血液中urea、crea、Ca2+含量、以及肾Mg2+含量均有显著性影响,能明显改善肾脏功能。肾组织病理学检查可知,该复方可减少大鼠肾内草酸钙沉积,减轻病变程度。 泽泻车前草复方配比为3:5的醇提物含量测定方法灵敏、准确、专属性强、重现性好;提取工艺简单、稳定、可行;样品在干燥密闭的环境下可以较长时间保存;药效研究证实其能有效防治大鼠泌尿系草酸钙结石。