论文部分内容阅读
沙门氏菌是一种病原菌,通常引起的疾病包括肠道炎和败血症,不仅可使人致病,也可使动物致病。而沙门菌入侵宿主细胞的第一步是沙门菌通过菌毛粘附到宿主细胞上。菌毛是沙门菌的粘附器官,是位于沙门菌表面的一些纤细的丝状物。在电子显微镜下可以看到,它是由多个蛋白亚基首尾顺次连接而成的,首先是从沙门菌的细胞外膜开始,由多个SafA蛋白顺次连接而延伸,并且科学家根据一些科学数据及资料猜测SafD蛋白最后会以“帽子”一样的作用盖到了多个SafA蛋白组成的纤毛结构上。然而,不论是SafD的功能还是结构,还是它在Saf菌毛上的位置都还是未知的。SafD可能位于Saf菌毛的顶端,但这仅仅是个假设,并未有实验证明。因此,SafD蛋白的解析对于沙门菌入侵宿主细胞机理的研究显得尤为重要。本论文首先描述了SafD(31-156)基因的克隆、表达及纯化过程,然而从纯化结果看,该基因表达的SafD(31-156)蛋白是不稳定的。紧接着又进行了SafD(31-156)-DSC基因的克隆、表达及纯化,从纯化结果看,该基因表达的SafD(31-156)-DSC蛋白是稳定的,经纯化我们得到足量的SafD(31-156)-DSC蛋白可用于长晶体,且纯度约为95%。于是开始了SafD(31-156)-DSC蛋白的结晶、优化、X射线衍射、收集数据及结构解析,最后成功解析出了分辨率为2.0?的SafD(31-156)-DSC蛋白结构,完整阐述了用结构生物学的手段对SafD蛋白进行研究的整个生物学实验过程。在应用方面,在根据解析后的SafD蛋白的三维结构设计针对沙门菌病原株的新型疫苗和设计针对沙门菌引起的疾病的快速诊断试剂盒方面具有潜在的应用价值。