鸡传染性支气管炎抗体ELISA诊断方法研究

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鸡传染性支气管炎病是传染性支气管炎病毒引起鸡的一种急性、高度接触性传染病,是威胁集约化养鸡场的主要疫病之一。本试验建立了一种用于检测鸡传染性支气管炎血清抗体的方便、特异、快速的检测方法。方法:利用9日龄SPF鸡胚尿囊腔复壮IBV,通过鸡胚成纤维细胞传代培养IBV,经过蔗糖密度梯度离心纯化病毒,测定蛋白含量(抗原浓度为7.7mg/ml),做系列稀释包被酶标板,利用过碘酸盐法将辣根过氧化物酶标记于兔抗鸡IgG上,作为酶结合物(酶工作浓度为1:800),也做一系列稀释,利用棋盘滴定法,分别确定包被抗原、酶结合物以及血清稀释度,用TMB作为显色剂,建立了检测血清样品中传染性支气管炎抗体(阳性临界值判定标准为0.14)的ELISA检测方法。结果:利用将IBV接种鸡胚成纤维细胞的方法而制备的抗原可用于本试验;与NDV,MDV,IBDV,AIV,APIV,REV,ILTV,IC,MG,MS等抗血清无交叉反应;与IBV Gray株、M株、Conn株、T株、B株、H株、Ark99株、SE17株的抗血清有交义反应,有较好的群特异性;与IDEXX IB-ELISA检测方法相比较,结果吻合较好。结论:成功的建立了传染性支气管炎间接ELISA检测方法,可用于检测血清样品中鸡传染性支气管炎抗体。
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