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目的:本研究拟探讨谷氨酰胺代谢对巨噬细胞活化过程中的作用和机制,及其在肾纤维化进程中的作用。方法:体外实验采用人髓系白血病细胞U937诱导分化为静息型巨噬细胞（M0）,给予20ng/ml IFN-γ和100ng/ml LPS诱导为M1型巨噬细胞,20ng/ml IL-4与20ng/ml IL-13诱导为M2型巨噬细胞,并在谷氨酰胺（Glutamine,Gln）存在或缺乏的培养条件下以及谷氨酰胺酶抑制剂BPTES的干预下检测巨噬细胞状态的改变和Akt-m TORC1信号通路的关键蛋白表达、磷酸化状态。应用Akt特异性抑制剂MK2206（5μM）和m TORC1特异性抑制剂Rapamycin（100μM）预处理细胞后,检测其对巨噬细胞活化的影响。体内实验构建单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠模型,模型制备后在第3、5、7天腹腔注射BPTES（12.5mg/Kg）,观察其对肾脏炎症细胞浸润、巨噬细胞活化和肾纤维化的影响。结果:体外实验中,谷氨酰胺缺失或BPTES干预后促进M1极化且抑制M2表型活化。在IFN-γ/LPS刺激下,谷氨酰胺缺失或BPTES干预后Akt-m TORC1信号通路被激活;在IL-4/IL-13刺激下,谷氨酰胺缺失或BPTES干预后Akt-m TORC1信号通路被抑制。应用Akt和m TORC1特异性抑制剂干预后,促进M1极化且抑制M2活化。体内实验中,与UUO模型组相比,应用BPTES干预UUO小鼠,可抑制肾组织中T细胞、B细胞、巨噬细胞和树突样细胞的浸润以及M2型巨噬细胞极化,减轻肾脏纤维化。结论:谷氨酰胺代谢通过Akt-m TORC1通路调控巨噬细胞的活化,抑制谷氨酰胺代谢,减少M2型巨噬细胞活化,进而改善肾脏纤维化。第一部分谷氨酰胺代谢通过Akt-m TORC1调控巨噬细胞的活化目的:探讨谷氨酰胺代谢对巨噬细胞活化的作用和机制。方法:应用佛波脂（phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA 100ng/ml）将U937细胞诱导分化为静息型巨噬细胞（M0）,分别给予LPS（Lipopolysaccharide,100ng/ml）与IFN-γ（Interferon-γ,20ng/ml）诱导为M1型巨噬细胞,IL-4（Interleukin-4,20ng/ml）和IL-13（Interleukin-13,20ng/ml）诱导为M2型巨噬细胞,并在谷氨酰胺存在或缺失的培养条件下以及在给予谷氨酰胺代谢抑制剂的情况下应用流式细胞术检测CD86、CD206的表达,Realtime PCR检测TNFα、TGFβ1的转录水平,Western Blot检测GBP5、Arg-1的表达,鉴定巨噬细胞表型;用Western Blot检测Akt-m TORC1信号通路的关键蛋白表达（Akt、m TOR、S6k、S6）及其磷酸化状态。通过Akt抑制剂MK2206（5μM）和m TORC1抑制剂Rapamycin（100μM）预处理细胞1h,应用流式细胞术检测CD86、CD206,Western Blot检测GBP5、Arg-1的表达。结果:谷氨酰胺缺失或BPTES干预后M1特异性标志物CD86、TNFα、GBP5高表达,M2特异性标志物CD206、TGFβ1、Arg-1低表达。IFN-γ/LPS和IL-4/IL-13刺激后p Akt、pm TOR、p S6k、p S6的表达水平明显上调;在IFN-γ/LPS刺激下,谷氨酰胺缺失或BPTES干预后上述指标的表达水平升高;在IL-4/IL-13刺激下,谷氨酰胺缺失或BPTES干预后上述指标的表达显著降低。MK2206和Rapamycin干预后,M1特异性标志物CD86、GBP5高表达,M2特异性标志物CD206、Arg-1表达下调。结论:谷氨酰胺代谢可通过Akt-m TORC1通路促进M2型巨噬细胞极化,抑制Akt-m TORC1通路促进M1型巨噬细胞活化而抑制M2极化。第二部分抑制谷氨酰胺代谢能抑制UUO诱导的肾纤维化目的:探究谷氨酰胺代谢是否能通过对巨噬细胞的影响来改善UUO诱导的肾纤维化。方法:构建单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠模型,第3、5、7天腹腔注射谷氨酰胺酶抑制剂BPTES,应用免疫组化检测CD3、CD11c、F4/80、B220的表达来观察其对T细胞、树突样细胞、巨噬细胞和B细胞浸润的影响;通过免疫组化检测CD86、CD206的表达来观察其对巨噬细胞活化的影响;通过Masson染色、Sirius red染色和免疫组化检测α-SMA的表达来观察其对肾纤维化的影响。结果:UUO小鼠模型中,应用BPTES干预UUO小鼠后可发现T细胞、树突样细胞、巨噬细胞和B细胞标志物CD3、CD11c、F4/80、B220表达减少;M2特异性标志物CD206表达减少,M1特异性标志物CD86表达无统计学差异;Masson染色、Sirius red染色可见肾间质纤维化减轻,免疫组化结果提示α-SMA的表达降低。结论:抑制谷氨酰胺代谢能抑制M2型巨噬细胞活化和改善肾脏纤维化。