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目的：
1.探索AQP4启动子区基因的多态性，并探讨其与我国多发性硬化(MS)及视神经脊髓炎(NMO)患者遗传易感性的关系，从遗传学角度对MS及NMO进行鉴别。
2.研究MS及NMO患者血清和脑脊液VEGF水平及脑脊液αB晶状体蛋白的差异，并探讨其与临床、实验室及影像学指标的关系，从免疫学角度对MS与NMO进行鉴别。
3.研究MS、NMO及临床孤立综合征(CIS)患者脑脊液sAPP、Aβ42水平的差异，及其与临床、实验室及影像学指标的关系，探讨APP对MS、NMO轴突损害评估及早期推测病情预后的作用。
4.研究MS、NMO及CIS患者血清及脑脊液BDNF、GDNF水平的差异，及其与临床、实验室及影像学指标的关系，探讨BDNF、GDNF对MS、NMO的神经保护作用。
方法：对124例符合入选标准的MS、NMO及CIS患者及78例对照组进行研究，其中MS患者分为OSMS及CMS两组。对所有MS、NMO及CIS患者复发期及缓解期进行EDSS评分，对95例MS、NMO及CIS患者进行头颅、脊髓及视神经MRI检查，5例MS患者进行了MRS及DTI检查，对109例MS、NMO及CIS患者进行了血清及脑脊液寡克隆带定量、定性测定。用酚/氯仿抽提法从患者及健康对照组全血标本中提取DNA，PCR扩增AQP4启动子区基因(AQP4-Promoter0和AQP4-Promoter1基因)，再对PCR产物进行纯化、测序，通过与GenBank公布的人类AQP4基因序列比较，寻找阳性突变位点。应用Western-blot法检测患者及对照组脑脊液中的sAPP及αB晶状体蛋白；用液相芯片分析技术检测血清及脑脊液BDNF、GDNF、VEGF、Aβ42浓度；用ELISA法检测脑脊液αsAPP浓度。
结果：
1.成功扩增并测定了80例患者(其中NMO8例、MS47例、CIS25例)和39例对照组的AQP4启动子区基因序列，共发现14个AQP4-promoter0阳性突变位点及6个AQP4-promoter1阳性突变位点。其中，MS患者AQP4-promoter0的-1003bp位点突变率(A突变为G)比对照组高，差异有统计学意义(P=0.016)；NMO及MS患者AQP4-promoter1的—401bp与—400bp位点之间的突变率(插入1个C)均比对照组高，差异有统计学意义(P=0.027和0.01)。
2.有AQP4启动子区基因突变的MS患者出现MRI下丘脑病灶的概率比无基因突变的MS患者高，差异有统计学意义(P=0.047)。
3.NMO、MS及CIS患者发作期脑脊液VEGF平均荧光强度比对照组高，差异有统计学意义(P=0.015、0.016及0.02)，但NMO与MS、CMS与OSMS患者之间无显著性差异(P>0.05)。
4.BBB指数升高组及Tourtellotte合成率升高组NMO及MS患者血清VEGF浓度比上述指标正常组高，差异有统计学意义(P=0.0037及0.021)。
5.Western—Blot结果显示，NMO、MS、CIS患者及对照组脑脊液中均可检测到分子量为110Kda及22Kda(分别与sAPP及αB晶状体蛋白分子量相同)的条带，各组条带的灰度强弱无明显差异。
6.NMO、MS、CIS和对照组脑脊液αsAPP与Aβ42浓度呈正相关关系(Spearman相关系数为0.37，P=0.011，Kendalls tua—b相关系数为0.265，P=0.009)，脑脊液αsAPP浓度与EDSS评分呈负相关关系(Spearman相关系数为—0.371，P=0.004；Kendalls tua—b相关系数为—0.258，P=0.007)，EDSS≥4.5分组患者脑脊液αsAPP浓度比EDSS<4.5分组低，差异有统计学意义(P=0.026)。
7.他汀类药物治疗组患者脑脊液αsAPP水平比无使用该药治疗组患者高，差异有统计学意义(P=0.023)。
8.MS患者脑脊液BDNF浓度比对照组高，差异有统计学意义(P=0.046)；血清与脑脊液BDNF浓度不相关(Pearson相关系数为—0.255，P=0.091)。
9.脑脊液BDNF与GDNF浓度呈正相关关系(Spearman相关系数为0.624，P<0.01；Kendalls tua—b相关系数为0.494，P<0.01)。
10.血清GDNF浓度与EDSS评分呈正相关(Spearman相关系数为0.303，P=0.025；Kendalls tua—b相关系数为0.203，P=0.038)，EDSS≥4.5分的患者血清GDNF浓度比EDSS<4.5分的患者高，差异有统计学意义(P=0.045)。
11.脑脊液BDNF、GDNF均与Aβ42呈正相关(Spearman相关系数分别为0.251及0.420，P<0.05；Kendalls tua—b相关系数分别为0.179及0.308，P<0.05)。
12.10名有MRI结果的NMO患者中，有4名(40％)发现有脑部MRI病灶，均为非特异的皮质下白质改变；5名行MRS检查的MS患者均显示病灶区NAA含量下降，且与脑脊液αsAPP水平升高相关。
结论：
1.成功完成了AQP4启动子区基因的扩增及DNA序列测定，发现了14个AQP4-promoter0阳性突变位点及6个AQP4-promoter1阳性突变位点。其中，AQP4-promoter0中-1003bp位点的突变(A突变为G)以及AQP4-promorter1中—401bp与—400bp位点之间的突变(插入1个C)与MS、NMO易感性有关。AQP4启动子区基因突变与MS患者MRI下丘脑病灶可能有一定的关系。
2.NMO、MS患者发作期脑脊液VEGF水平比对照组高，但与临床分型无关。血清VEGF浓度与MS病灶中BBB破坏的形成及CNS内IgG合成有关。
3.sAPP及αB晶状体蛋白在NMO、MS、CIS患者及对照组脑脊液中均存在，各组含量未见明显差异。
4.脑脊液αsAPP水平与NMO、MS患者神经功能残疾及MRS中NAA含量下降相关。脑脊液αsAPP及Aβ42浓度呈正相关，二者可能均可用于MS轴突损伤的评估。他汀类药物可能通过提高脑脊液αsAPP水平对NMO及MS患者具有神经保护作用。
5.MS患者脑脊液BDNF浓度比对照组高，可能是CNS损伤后机体的一种代偿机制。血清与脑脊液BDNF浓度不相关，提示二者来源可能不同。MS、NMO患者脑脊液BDNF与GDNF水平呈正相关关系，二者对神经保护可能具有协同作用。血清及脑脊液BDNF、GDNF水平与NMO、MS患者神经功能残疾及轴突损伤相关。
6.NMO患者也可出现脑部MRI异常，且多为非特异的皮质下白质改变。