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背景microRNA-21(miR-21)是人类发现最早的微小RNA之一,它在乳腺癌、肺癌、胃癌、胶质母细胞瘤、胰腺神经内分泌肿瘤、胰腺癌、胆管癌、肝癌、前列腺癌等癌症中均呈现过度表达。特别是在人类的脑胶质母细胞瘤(高度恶性)中,miR-21的表达水平可以高出其他非癌组织6-10倍；但是,在正常成人脑白质里,miR-21也有低水平表达。由此看来,miR-21的表达没有特别明显的特异性。但在人的乳腺癌中,miR-21的表达显著上升,这就提示我们miR-21在某些肿瘤的发展发生中可能起到一个癌基因的作用。大量研究表明：miR-21促进肿瘤细胞转化的功能是依靠抑制抑癌基因即程序性细胞死亡因子4来实现的。程序性细胞凋亡因子4(PDCD4)是近年来发现的一种新型的肿瘤抑制因子,它是P13K/Akt信号通路的下游分子,PDCD4是通过抑制丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶激酶1(MAP4K1)表达作用的。PDCD4降低E-cadherin的表达,并激活β-catenin/Tcf(T细胞因子)在结肠肿瘤细胞依赖的转录抑制,这些结果提供了分子解释PDCD4抑制肿瘤侵袭的原因。因此,PDCD4具有抑制肿瘤生成、促进细胞凋亡的作用。本实验通过在甲状腺乳头状癌TPC-1中瞬时转染miR-21,之后用免疫组化以及流式细胞仪技术检测转染前后细胞的凋亡和增殖以及PDCD4的表达。从而探讨两者之间的关系及在它们甲状腺乳头状癌中的作用机制。目的通过用脂质体转染试剂Lipofectamine2000TM进行瞬时转染真核重组质粒pEZX-eGFP-miR-21,使得该质粒在甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中得到稳定高表达,这为接下来进一步研究miR-21在甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中的的凋亡、转移、增殖中的作用及其基因调控机制打下坚实的基础。方法(1)经Lipofectamine2000TM将miR-21进行瞬时转染至甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中；(2)然后利用免疫组化法鉴定瞬时转染后的重组质粒pEZX-eGFP-miR-21,免疫组化检测转染后PDCD4表达情况；(3)用MTT法测瞬时转染miR-21后TPC-1细胞增殖情况；观察转染前后细胞增殖变化曲线；(4)采用流式细胞法检测瞬时转染后TPC-1细胞凋亡,观察转染前后细胞凋亡变化图像。结果(1)经脂质体传染试剂将miR-21进行瞬时转染至甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中后,转染后的TPC-1细胞中有较大比例的梭型细胞表达绿色荧光蛋白；(2)经免疫组化检测转染后瞬时转染miR-21组中,转染组细胞膜呈棕褐色,PDCD4的表达明显高于对照组；(3)MTT法检测转染miR-21基因后可以明显促进TPC-1细胞的增殖。转染组和空质粒组的细胞数都有所增加,但转染组的TPC-1细胞增殖的更快。(P<0.05);(4)转染miR-21的细胞凋亡率与对照组之间有显著差异性,凋亡率明显减少。结论瞬时转染pEZX-eGFP-miR-21后,转染后细胞增殖得到促进,凋亡减少,提示miR-21的高表达可促进甲状腺乳头状癌的发展,这种作用可能是通过下调PDCD4蛋白的表达来实现。