论文部分内容阅读
目的:不同的辅助性T淋巴细胞亚群在动脉粥样硬化进展过程中发挥不同的作用。为了明确辅助性T淋巴细胞各亚群的变化与急性心肌梗死及冠心病进展的关系,我们分析了辅助性T淋巴细胞3个亚群Th1,Th2,Th17及它们分泌的相应细胞因子IFN-γ,IL-4,IL-17A在急性心肌梗死、不稳定性心绞痛与造影正常的胸痛患者血液中的不同水平。方法:1)本实验共选取了30名冠心病患者(急性心肌梗死组15例,不稳定性心绞痛组15例)和造影正常的胸痛患者(对照组)15例。研究对象入选后即抽取外周静脉血,术中抽取冠脉血,经密度梯度离心法分离单个核细胞。2)流式细胞分析法检测冠脉内及外周血中Th1,Th2及Th17细胞含量。标本单个核细胞在37°C,5%CO2条件下加入Brefield A孵育4小时。然后进行膜表面分子CD4的荧光染色。破膜后进行胞内细胞因子IFN-γ、IL-4及IL-17A的免疫荧光染色。染色完毕,将标本进行流式细胞分析。结果表示为CD4+T细胞亚群中细胞因子染色阳性的细胞百分比。3)ELISA法检测研究对象各部位标本血浆中的IFN-γ,IL-4和IL-17A的浓度。标本抗凝后立即离心,收集血浆立即保存于–80°C。检测时复融,应用相应ELISA检测试剂盒检测标本中的细胞因子浓度。结果:1)研究对象的一般信息。对照组(Control),不稳定性心绞痛组(UA)及急性心肌梗死组(AMI)在年龄,性别,血脂,血糖,高血压和吸烟等危险因素方面都无明显差异。2)流式细胞技术检测Control,UA及AMI患者冠脉内和外周静脉血中辅助性T淋巴细胞各亚群Th17/Th1/Th2的含量。①AMI患者、UA患者及对照组外周静脉血辅助性T淋巴细胞亚群变化:AMI患者外周血Th17百分比(0.35±0.05%)高于UA患者(0.25±0.03%)及对照组(0.12±0.01%()P<0.01),UA组Th17百分比高于对照组(P<0.05);AMI患者外周血Th1百分比(0.52±0.12%)高于UA患者(0.33±0.05%)及对照组(0.16±0.02%)(P<0.05),UA组Th1百分比高于对照组(P<0.01);AMI患者外周血Th2百分比(0.53±0.11%)高于UA患者(0.17±0.02%)及对照组(0.30±0.05%)(P<0.01),UA组Th2百分比低于对照组(P<0.01)。②AMI组、UA组及对照组冠脉内外辅助性T淋巴细胞亚群含量比较:AMI患者罪犯血管冠脉阻塞段血液中Th17百分比(0.58±0.14%)高于外周静脉血中(0.35±0.05%)(P<0.05),UA患者冠脉内血液Th17百分比(0.31±0.03%)与外周静脉血(0.25±0.03%),两者相比无统计学差异(P>0.05),对照组冠脉内血液Th17百分比(0.14±0.01%)与外周静脉血(0.12±0.01%)相比无统计学差异(P>0.05);AMI患者罪犯血管冠脉阻塞段血液中Th1百分比(0.76±0.13%)高于外周静脉血(0.52±0.12%)(P<0.01),UA患者冠脉内血液Th1百分比(0.32±0.05%)与外周静脉血(0.33±0.05%)相比无统计学差异(P>0.05),对照组冠脉内血液Th1百分比(0.16±0.01%)与外周静脉血(0.16±0.02%)相比无统计学差异(P>0.05);AMI患者罪犯血管冠脉阻塞段血液中Th2百分比(0.84±0.20%)高于外周静脉血(0.53±0.11%)(P<0.01),UA患者冠脉内血液Th2百分比(0.19±0.03%)与外周静脉血(0.17±0.02%)相比无统计学差异(P>0.05),对照组冠脉内血液Th2百分比(0.30±0.03%)与外周静脉血(0.30±0.05%)相比无统计学差异(P>0.05)。3)双抗体夹心ELISA检测比较AMI患者、UA患者及对照组冠脉内和外周静脉血血浆中细胞因子IL-17A、IFN-γ及IL-4血浆浓度。①AMI患者、UA患者及对照组外周静脉血中细胞因子IL-17A、IFN-γ、IL-4血浆浓度变化:AMI患者IL-17A血浆浓度(250.04±47.58pg/ml)高于UA患者(130.5±16.97 pg/ml)及对照组(59.86±5.70 pg/ml)(P<0.05),UA组IL-17A血浆浓度高于对照组(P<0.05);AMI患者IFN-γ血浆浓度( 73.3±9.87 pg/ml )高于UA患者(33.26±6.15pg/ml)及对照组(15.03±0.51 pg/ml)(P<0.05),UA组IFN-γ血浆浓度高于对照组(P<0.05);AMI患者IL-4血浆浓度(8.93±2.33 pg/ml)与对照组(12.63±1.24 pg/ml)相比无统计学差异(P>0.05),UA患者IL-4血浆浓度未达到试剂盒检测下限。②AMI组、UA组及对照组冠脉内外IL-17A、IFN-γ、IL-4血浆浓度比较:AMI患者罪犯血管冠脉阻塞段血液中IL-17A血浆浓度(529.91±57.17 pg/ml)高于外周静脉血(250.04±47.58 pg/ml)(P<0.01),UA患者冠脉内血液IL-17A血浆浓度(247.47±64.39 pg/ml)与外周静脉血(130.5±16.97 pg/ml),两者相比无统计学差异(P>0.05),IL-17A血浆浓度(80.66±10.98 pg/ml)与外周静脉血(59.86±5.70 pg/ml)相比无统计学差异(P>0.05);AMI患者罪犯血管冠脉阻塞段血液中IFN-γ血浆浓度(102.08±19.42pg/ml)高于外周静脉血(73.3±9.87 pg/ml)(P<0.05),UA患者冠脉内血液IFN-γ血浆浓度(25.48±7.06 pg/ml)与外周静脉血(33.26±6.00pg/ml)相比无统计学差异(P>0.05),对照组冠脉内血液IFN-γ血浆浓度(16.63±1.18 pg/ml)与外周静脉血(15.03±0.51 pg/ml)相比无统计学差异(P>0.05);AMI患者罪犯血管冠脉阻塞段血液中IL-4血浆浓度(17.25±4.5 pg/ml)高于外周静脉血中(8.93±2.33 pg/ml)(P<0.01);对照组冠脉内血液IL-4血浆浓度(12.28±1.34 pg/ml)与外周静脉血(12.63±1.24 pg/ml)相比无统计学差异(P>0.05)。结论:本实验研究发现随着动脉粥样硬化斑块不稳定的加剧,Th17、Th1及细胞因子IFN-γ,IL-17A的数量显著增高。Th2在AMI患者较之对照组,增高,而UA患者较之对照组降低。本实验首次证明Th17在动脉粥样硬化及急性心肌梗死患者被活化,且AMI患者阻塞冠脉局部免疫反应强于外周。Th17与Th1一样均可促进动脉粥样硬化的进展和不稳定性,导致冠心病的进展。