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目的：分析大鼠不同脑区线粒体中α-突触核蛋白(α-synuclein,α-SYN)含量与氧化应激水平的相互关系,分析这种关系对帕金森病(Parkinsons Disease,PD)选择性神经元损害的可能作用。
方法：
1、用10％水合氯醛麻醉动物后取脑,分离出海马、嗅球、纹状体、小脑和额叶皮层,制备组织匀浆。BCA法进行蛋白定量。
2、根据氧化应激试剂盒说明书操作,测定不同脑区组织的T-AOC(总抗氧化能力)、GSH(谷胱甘肽)、GSH-PX(谷胱甘肽过氧化物酶)、MDA(丙二醛)、SOD(超氧化物歧化酶)等氧化和抗氧化指标,分析不同脑区的氧化和抗氧化指标的差异。
3、Percoll密度梯度离心法提取不同脑区组织线粒体,Western blot法和ELISA法测定线粒体中α-SYN含量。
结果：
1、用重组人α-SYN蛋白作为标准蛋白,建立ELISA测试标准曲线,其灵敏度为4.0×10-6g/L,批内变异系数为3.54％±0.75％,批间变异系数为7.14％±1.25％。重组人α-SYN蛋白浓度在4.0～128.0 ng/ml时,吸光度Y(OD)与人重组α-SYN蛋白浓度X(ng/ml)呈直线关系。
2、Western blot分析结果表明,嗅球、纹状体部位线粒体中的α-SYN含量较高,额叶皮层和小脑线粒体中的α-SYN含量较低。ELISA法分析各个脑区线粒体中α-SYN含量的结果与Western blot分析结果基本一致。嗅球、纹状体、海马、额叶皮层和小脑部位线粒体中的α-SYN含量分别为4.16±0.61 ng/μgprotein、5.14±0.22 ng/μg protein、3.36±0.54 ng/μg protein、3.19±0.30 ng/μgprotein和2.88±0.22 ng/μg protein。不同脑区线粒体中的α-SYN含量的差异具有显著性(n=6,P<0.05)。
3、大鼠不同脑区间的抗氧化指标(T-AOC,GSH,GSH-PX,SOD)以及细胞氧化损伤程度的指标(MDA)略有差异,但统计结果无显著差异(P>0.05)。不同脑区各种抗氧化指标的相对量分别为:GSH:小脑>纹状体>额叶>嗅球>海马；GSH-PX:小脑>纹状体>嗅球>额叶>海马；T-AOC:海马>嗅球>小脑>纹状体>额叶；SOD:纹状体>小脑>嗅球>额叶>海马。不同脑区氧化损伤指标MDA的相对量为:嗅球>海马>纹状体>额叶>小脑。
结论：
1、不同脑区线粒体中的α-SYN含量不同,以嗅球和纹状体较高,额叶皮层和小脑较低。
2、不同脑区的氧化和抗氧化指标的差别无统计学意义上的显著性。
3、不同脑区氧化应激程度与相应脑区线粒体中α-SYN含量没有明显关系。