【摘 要】
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背景:脑死亡是指“包括脑干功能在内的全脑功能的不可逆终止”。脑死亡是一个复杂的病理生理过程,可以引起机体一系列复杂的病理生理变化。巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor,MIF）是具有多效炎性介质功能的细胞因子,同时也是重要的内分泌激素。它具有广泛的免疫调节功能的蛋白,在应激作用下可诱导炎症介质的释放,进而促进炎症反应。最近的研究表明,M
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背景:脑死亡是指“包括脑干功能在内的全脑功能的不可逆终止”。脑死亡是一个复杂的病理生理过程,可以引起机体一系列复杂的病理生理变化。巨噬细胞迁移抑制因子（Macrophage migration inhibitory factor,MIF）是具有多效炎性介质功能的细胞因子,同时也是重要的内分泌激素。它具有广泛的免疫调节功能的蛋白,在应激作用下可诱导炎症介质的释放,进而促进炎症反应。最近的研究表明,MIF可由许多种类型细胞表达,包括具有免疫功能的细胞和无免疫功能的细胞。另外,MIF可参与广泛的脏器损伤。目的:1.探究MIF在脑死亡大鼠肝脏中的表达情况2.探究MIF在脑死亡大鼠肝脏损伤中的作用3.探究MIF介导脑死亡状态下肝损伤的机制方法:1.探究MIF在脑死亡状态下的表达:采用缓慢间歇颅内加压法,诱导脑死亡的发生。免疫组织化学检测MIF在大鼠肝脏中的定位与表达;实时荧光定量（qPCR）、蛋白质免疫印迹检测MIF在脑死亡大鼠肝脏中的表达情况。2.探究MIF在肝细胞损伤中的作用和机制研究:将SD实验大鼠按照随机的方式分为4组:脑死亡组、假手术组、假手术+rMIF组、脑死亡+MIF拮抗剂ISO-1组。脑死亡+ISO-1组在颅内加压开始前30min进行ISO-1预处理;假手术+重组巨噬细胞迁移抑制因子（Recombinant MIF,rMIF）组在进行相关操作前半小时静脉注射rMIF。ELISA法检测各组大鼠血清中的IL-6、IL-1β、TNF-α的浓度,qPCR检测大鼠肝脏中IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达;Western blot检测大鼠肝脏中NF-KB、MAPK蛋白的表达及其激活的情况;免疫组化检测NF-κB、MAPK的在肝细胞内的活化;生化分析仪检测大鼠血清中ALT及AST,HE染色观察肝脏损伤。结果:1.MIF在大鼠脑死亡后肝组织中表达升高,在蛋白和RNA水平表达均升高。另外,免疫组化结果也提示MIF在脑死亡后肝组织中高表达。2.MIF对大鼠肝细胞具有损伤作用;在假手术大鼠中使用外源性rMIF预处理,肝脏细胞损伤较假手术组有明显差异,且肝功能恶化;脑死亡+ISO-1组肝脏细胞损伤较脑死亡组有明显差异,较脑死亡组损伤减轻,肝功能好转。3.MIF可促进脑死亡状态下肝脏炎症反应;脑死亡组与脑死亡加ISO-1组血清中IL-6、IL-1β、TNF-α的浓度及mRNA的表达具有统计学差异。ISO-1干预后炎症因子明显降低。在假手术大鼠中使用外源性rMIF预处理后,血清中IL-6、IL-1β、TNF-α及其mRNA相对表达明显升高。4.MIF可能通过MAPK/NF-KB通路介导脑死亡状态下肝损伤;ISO-1干预后的脑死亡组大鼠肝脏细胞NF-KB和MAPK的活化明显降低;假手术组加入外源性rMIF后大鼠肝细胞NF-KB和MAPK的活化明显升高。ISO-1干预后的脑死亡组大鼠肝脏细胞核内NF-KB和MAPK的阳性率明显降低;假手术组加入外源性rMIF后大鼠肝细胞NF-KB和MAPK的阳性率明显升高。结论:1.MIF在大鼠脑死亡肝脏组织中表达升高;2.MIF对大鼠肝细胞具有损伤作用;3.MIF可促进脑死亡状态下肝脏炎症反应;4.MIF可能通过MAPK/NF-κB通路介导脑死亡状态下肝损伤。
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