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目的:喘息是婴幼儿常见的呼吸道症状,反复喘息的发生可导致哮喘的发病。了解喘息急性发作的发生机制,有助于哮喘的防治。本研究通过ELISA法检测喘息急性发作期患儿血浆IL-10和TGF-β1水平,探讨免疫耐受的调控在喘息急性发作期作用;并采用16SRNA荧光定量PCR法检测喘息急性发作期患儿粪便中双歧杆菌与大肠杆菌的数量并计算B/E值,探讨肠道菌群在喘息急性发作期作用,进一步了解肠道菌群、免疫耐受和喘息发作三者之间的关系,为微生态制剂用于婴幼儿喘息的防治提出理论依据。
方法:收集2009年9月-2010年2月在河北医科大学第三医院儿科就诊及住院的伴有喘息的下呼吸道感染患儿(即A组)47例,诊断符合下呼吸道感染的标准,伴有喘息症状,发作时双肺可闻及呼气相哮鸣音,呼气相延长,并且除外其他引起喘息的疾病,其中入院前未用抗生素者22例,入院前应用抗生素5天内者25例。同期收集不伴有喘息的下呼吸道感染患儿(即B组)40例,诊断符合下呼吸道感染的标准,其中入院前未用抗生素者18例,入院前应用抗生素5天内者22例。同时选择同期来我院健康查体的儿童(即C组)30例。三组之间性别、年龄、体重、身高、出生方式、喂养方式、生活地域均无显著性差异。A、B组于入院当日,C组于清晨空腹状态下抽取静脉血2ml,离心1500rpm15min后取上清,应用ELISA方法测定血浆IL-10、TGF-βi的水平。同步收集粪便,应用细菌16SrRNA荧光定量PCR方法测定双歧杆菌、大肠杆菌的数量,并计算B/E值。所有数据采用均数±标准差((?)±s)表示。采用SPSS13.0统计软件进行统计分析。所有资料进行方差齐性及正态性检验,两样本均数比较采取t检验,若方差不齐,采用t检验。相关性分析采用perason直线相关分析。显著性差异水平以<0.05为标准。
结果:1.各组儿童肠道菌群的定量分析显示:A1、B1组粪便中双歧杆菌数量、B/E值均低于C组,差异有统计学意义(P<0.05),A1与A2、B1组比较,双歧杆菌数量、B/E值无差别(P>o.05)。B2组双歧杆菌数量、B/E值低于B1组,差异有统计学意义(P<0.05)(见Table2)。2.各组儿童血浆细胞因子IL-10、TGF-β1水平变化:A1组血浆IL-10、TGF-β1浓度低于C组,差异有统计学意义(P<0.05);A1与A2组比较,血浆IL-10、TGF-β1浓度无差别(P>0.05);A1与B1组比较,血浆IL-10、TGF-β1浓度降低(P<0.05)。B1组血浆IL-10、TGF-β1浓度高于C组,差异有统计学意义(P<0.05),B1与B2组比较,血浆IL-10、TGF-β1浓度无差别(P>0.05)(见Table3)。3.喘息急性发作期儿童血浆IL-10、TGF-β1水平与肠道B/E比值相关性分析:A1组血浆IL-10浓度与肠道B/E值成直线正相关关系,相关系数r=0.627(P<0.05)(见Fig.8);A1组血浆TGF-β1浓度与肠道B/E值成直线正相关关系,相关系数r=0.632(P<0.05)(见Fig.9)。
结论:1.喘息急性发作期儿童存在免疫网络紊乱,免疫耐受状态被打破,表现在血浆抑制性细胞因子IL-10和TGF-[31水平降低。2.喘息急性发作期儿童发生肠道菌群紊乱,表现在双歧杆菌的数量、B/E值下降。3.喘息急性发作期儿童肠道B/E值与血浆IL-10、TGF-β1水平的相关分析表明,B/E值与血浆IL-10、TGF-β1水平呈直线正相关关系,表明菌群紊乱与免疫耐受之间关系密切。儿童的喘息急性发作是建立在肠道菌群失衡和免疫耐受发生缺陷的基础之上。4.研究结论提示,生命早期免疫耐受的建立对于预防和降低喘息急性发作发挥重要意义。