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禽白血病(Avian leukosis, AL)是由禽白血病/肉瘤病毒(Avian Leukosis/Sarcoma virus, ALSV)引起的各种可传播的良性和恶性肿瘤的总称。根据病毒囊膜蛋白抗原特性、宿主范围和病毒间的干扰作用，可将ALSV分为A～J10个亚群，ALSV-E系内源性病毒，而其余9个亚群均为外源性ALSV。其中可感染鸡的亚群分别是ALSV-A、B、C、D、E和J6个亚群，而F、G亚群仅仅分离自雉，而H和I亚群也仅分别分离自匈牙利鹧鸪和鹌鹑。根据转化细胞和诱导肿瘤产生的速度，可将ALSV分为急性转化型和慢性转化型；根据基因组缺失与否，又可将ALSV分为完整型和缺陷型ALSV。本课题对分离自我国肉种鸡群中ALSV病原开展了初步的致病性研究。鸡场采集发病死亡肉种鸡实质性肿瘤病料。通过RT-PCR方法检测病原：设计与肿瘤相关病毒的基因引物，包括ALV-J、ALV-A,B,C,D,E通用引物1(下称通用引物1)，REV、MDV。琼脂糖凝胶电泳显示，由ALV基因设计的通用引物1，RT-PCR后，DL2000Marker指示，显示出250bp-500bp大小的特异性目的条带。测序发现为312bp目的条带，为内源性ALV。可排除完整ALV-J、REV、MDV所致的肿瘤的病因。病料接种原代CEF(SPF鸡胚制备)，连续培养四代，4th可见细胞发生病变(CPE)，而8th可见典型的“岛状”转化细胞形态，而空白对照组无此细胞形态，皆为梭状形态，提取8th细胞毒总DNA，分别使用ALV-A、ALV-B/D、ALV-C、ALV-E、ALV通用引物2、ALV-J、REV、MDV特异性引物进行PCR，琼脂糖凝胶电泳结果显示，只有使用ALV-E、ALV通用引物2为引物时分别出现相应约为1250bp、2400bp的目的片段。将病原传至7th的CEF毒接种于单层细胞贴壁量为75%的DF-1细胞和CEF，分别重新传代至8th。结果显示，CEF出现如上所述的典型转化细胞形态，空白组不存在；DF-1接毒组和空白对照组皆无CPE，而且彼此之间形态无差别；分别对CEF接毒组及其空白对照组；DF-1接毒组及其空白对照组，提取细胞总DNA，分别选择ALV基因组通用引物1，ALV-J、REV、MDV基因组相应特异性引物进行PCR，扩增产物的琼脂糖凝胶电泳显示，只有与CEF接毒组对应的ALV通用引物1获得250bp-500bp的目的条带，与上述条带一致。再将上述样品DNA，分别选择ALV-A、ALV-B/D、ALV-C、ALV-E、ALV-J、ALV通用引物2进行PCR，扩增产物琼脂糖凝胶电泳显示，同样只有与CEF接毒组对应的ALV-E、ALV通用引物2分别获得大小为1000bp、2500bp左右的目的片段。将同时接种相同的CEF细胞毒的DF-1细胞和CEF(接毒后4d)以及空白组CEF进行细胞透射电镜样品的制备。透射电镜观察结果显示：1、只有CEF接毒组存在直径约为100nm左右的中心黑色，外围黑灰色并被包裹在“液泡”内的病毒粒子，而空白对照组并没有任何病毒粒子或形似病毒粒子的存在；2、DF-1接毒组以及空白组不存在任何病毒粒子或形似病毒粒子。将8thCEF细胞毒接种于6日龄SPF鸡胚卵黄囊，并分别设立125μL/枚(下称“低剂量组”)、250μL/枚(下称“中剂量组”)、500μL/枚(下称“高剂量组”)三个梯度；以及三个对应的阴性对照组，分别接种相应剂量的无毒细胞培养液；另设一空白对照组。每组20枚鸡胚。结果显示：1、高剂量组、中剂量组、低剂量组的未出壳率分别为8/20、5/20、4/20，对应的阴性对照组未出壳率分别为1/20、2/20、1/20，空白对照组为2/20；2、截止试验结束，包括未出壳的情况，并排除自然死亡情况，高剂量组、中剂量组和低剂量组的死亡率分别为75%、55%、35%，且死亡日龄主要集中在出壳后42日龄内。临床观察发现：死亡鸡都存在严重贫血现象，鸡冠苍白无色，爪垫出现疑似血管瘤病灶，并出现溃崩。截止试验结束(出壳后80d)，不同接毒剂量组的肉种鸡重量仅为空白对照组的1/3左右；3、解剖发病死亡鸡发现，肝、脾、肾较苍白，存在严重贫血，同时肝和肾有出血点；4、病理组织切片HE染色后，镜检发现：肝、肾、腺胃、肠道等血管存在大量粘液样、均质性物质，疑似为粘液瘤，同时还发现疑似血管瘤和纤维瘤的病变特征。通过以上分子生物学、细胞生物学技术的检测，结合临床症状以及病理学组织切片观察发现该分离株(FJAU11W1)的致病特点具有急性转化型ALSV的致病特征，在感染CEF细胞中形成疑似病毒颗粒，同时，病毒核酸序列分析表现为内源性病毒核苷酸序列特征，初步推断，该分离株为内源性ALSV辅助，具有急性转化能力的复制缺陷性ALSV。