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香菇（Lentinulaedodes(Berk.)Pegler）是世界上栽培范围最广的食用菌之一。香菇病毒是香菇生产上较重要的一类潜在隐患。我们在前期的研究中发现，中国香菇种质资源中主要携带有2种病毒，分别为L.edodespartitivirus1（LePV1）和L.edodesmycovirusHKB（LeV-HKB），这2种病毒能单一或复合感染香菇。本研究进一步以单重RT-PCR为基础，通过对反应条件和参数的摸索与优化，建立了同时检测这2种病毒的半定量多重快速检测体系；此外，采用化学脱毒和菌丝碎片脱毒对这2种主要病毒进行病毒脱除研究，建立了适合于这2种主要病毒的脱除技术，并对脱毒前后菌株基本生物学特性进行了初步分析。取得的主要研究结果如下： （1）香菇主要病毒LeV-HKB和LePV1半定量多重RT-PCR检测体系建立：以LeV-HKB、LePV1病毒单重RT-PCR检测技术为基础，加入香菇β-actin基因作为内参，对单重和多重RT-PCR检测体系中RNA提取技术，反转录体系中RNA浓度，cDNA浓度、PCR体系中引物浓度、dNTP浓度、退火温度和循环次数进行筛选优化。建立了以STE法为RNA提取方式，反转录体系中RNA浓度为50ng/μL，cDNA浓度为0.5-25ng/μL，20μLPCR体系中引物浓度和dNTP浓度为0.25μmol/L，退火温度为57.4℃，循环次数为35，能同时检测LeV-HKB病毒和LePV1病毒，并能通过比较病毒与β-actinPCR产物的亮度初步了解菌丝体内病毒的含量的半定量多重RT-PCR检测体系。对两种病毒的PCR产物进行了克隆和测序，扩增基因片段与登记的病毒序列同源性99%以上，并利用建立的半定量多重RT-PCR检测技术对香菇核心种质进行检测，结合我们此前的报道，结果一致。所建立的半定量多重RT-PCR技术具有特异性高、灵敏度好、适用性强的特点。 （2）化学药剂和物理方法（菌丝碎片）对香菇主要病毒LeV-HKB和LePV1的脱毒作用研究：以单独携带和复合感染有LeV-HKB和LePV1的8个香菇菌株为材料，分别用0.75μg/mL的放线菌酮处理8个周期，经半定量多重RT-PCR检测，结果表明放线菌酮对LeV-HKB和LePV1病毒无明显的效果；进一步对处理前后的菌株采用qRT-PCR检测病毒表达量变化。研究结果表明，与处理前菌株病毒表达量相比，采用放线菌酮处理8个周期后的绝大多数菌株LeV-HKB和LePV1病毒表达量均下调。以单独携带和复合感染有LeV-HKB和LePV1的10个香菇菌株为材料，分别用100μg/mL病毒唑处理8个周期。半定量多重RT-PCR检测发现，病毒唑能有效地脱除部分供试菌株携带的LeV-HKB，而不能脱除LePV1。进一步采用qRT-PCR对不能脱除LeV-HKB和LePV1的供试菌株检测发现，与脱毒前相比，大多数菌株采用100μg/mL病毒唑处理8个周期后能显著降低病毒表达量。对单独携带和复合感染LeV-HKB和LePV1病毒的6个香菇菌株进行菌丝碎片脱毒处理，结果表明，采用菌丝碎片法能有效脱除部分供试菌株LeV-HKB和LePV1，但脱除效率还有待进一步提升。 （3）对供试菌株病毒脱除前后的菌丝生长速度进行了比较分析，结果表明所有脱除了病毒菌株的菌丝生长速度均快于出发菌株，且绝大多数菌丝生长速度显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）快于出发菌株。 该项研究为从源头（菌种）控制香菇病毒病害发生和追踪类似病毒病害的发生、流行监控等方面奠定重要理论和技术基础。