【摘 要】
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目的:研究石菖蒲-益智仁精油的提取方法,省睡方水提液和精油的抗AD活性及机制。方法:(1)采用水蒸气蒸馏提取法和超临界CO2萃取法进行石菖蒲-益智仁精油的提取,用GC-MS法对提取的精油进行成分分析,并运用基于计算机系统的网络药理学方法,构建精油成分-靶点网络、成分-靶点-疾病网络及蛋白作用通路网络图,对不同提取方法所得精油关键成分活性进行预测比较,指导精油提取方法的选择。(2)采用Aβ1-42复
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目的:研究石菖蒲-益智仁精油的提取方法,省睡方水提液和精油的抗AD活性及机制。方法:(1)采用水蒸气蒸馏提取法和超临界CO2萃取法进行石菖蒲-益智仁精油的提取,用GC-MS法对提取的精油进行成分分析,并运用基于计算机系统的网络药理学方法,构建精油成分-靶点网络、成分-靶点-疾病网络及蛋白作用通路网络图,对不同提取方法所得精油关键成分活性进行预测比较,指导精油提取方法的选择。(2)采用Aβ1-42复制的AD小鼠模型及APP/PS1双转基因AD小鼠模型,以行为学、组织形态学、相关递质含量水平的改变,对省睡方水提液灌胃及精油吸嗅抗AD活性进行研究。(3)采用免疫组化法,分析省睡方水提液及精油干预后小鼠脑内能量相关生化指标的变化,选取葡萄糖转运体1(GLUT-1)及胰岛素通路关键分子1(IRS-1)为指标,观察省睡方防治AD的可能机制。结果:(1)通过GC-MS对两种不同提取方法所得精油进行分析,水蒸气蒸馏法共鉴定出挥发性成分35种,以醚类(54.70%)、烯类(25.82%)、酮类(2.88%)、醇类(1.68%)为主,超临界CO2萃取法共鉴定出49种,以醚类(37.97%)、烯类(20.26%)、酮类(16.81%)、烷类(7.40%)、醇类(0.92%)为主。(2)通过C-T-D网络的构建,依据degree(度值)分析发现,水蒸气蒸馏提取中度值在8以上的成分有14种,主要为醚、醇、烯类化合物(合计相对百分含量64.12%);超临界萃取中度值8以上的成分有10种,主要为醚、醇、烯类化合物(合计相对百分含量45.35%),而超临界中占比较大的烷类(7.40%)、酮类(16.81%)化合物仅发现茉莉酮(0.22%)具有抗AD的靶点。提示在抗AD活性预测中,醚、醇、烯类化合物起着重要的作用,且水蒸气蒸馏法相关成分的含量多于超临界,超临界提取虽能提取出更多种类的化合物,但与抗AD活性不呈正相关。(3)药效验证中,与正常组比较,模型组跳台实验潜伏期显著收缩,错误次数显著增长(P<0.01),Morris水迷宫实验定位航行逃避潜伏期明显延长(P<0.05,P<0.01),海马CA1区神经元出现缺失,DG区出现明显的老年斑沉积(P<0.05),ACH含量均显著下降,GABA,GLU水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组均可显著延长小鼠跳台实验潜伏期、减少跳台错误次数(P<0.01),明显降低定位航行小鼠逃避潜伏期(P<0.01,P<0.05),可以一定程度保护小鼠海马CA1区神经元,减少DG区老年斑沉积(P<0.05,P<0.01),明显增加小鼠脑组织中ACH表达(P<0.05,P<0.01),减少GABA,GLU水平(P<0.01)。(4)免疫组化实验中,与正常组比较,模型组GLUT1含量均显著下降(P<0.01),IRS-1的表达均显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组明显增加小鼠脑组织中GLUT1表达(P<0.05,P<0.01),减少IRS-1的表达(P<0.01)。结论:水蒸气蒸馏法、超临界CO2萃取法所获得的石菖蒲-益智仁精油均具有丰富的活性成分,均具有潜在的防治AD的活性,通过吸嗅给药能在动物模型中得到相应的验证,调控神经递质系统、淀粉样蛋白水平及能量代谢是石菖蒲-益智仁精油防治AD的机制之一。
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