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肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)作为一种恶性肿瘤,极易复发且死亡率高。目前普遍认可医治肝癌的临床方法是手术和化疗,但效果并不理想,肝癌导致的死亡率仍然居高不下。乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一类传染性疾病,最终可发展为肝硬化甚至是肝癌。目前治疗HBV的药物价格昂贵,而且在治疗的同时损伤了机体免疫力。因此开发一种天然无毒、能够杀伤肿瘤细胞且增加机体免疫功能的抗肿瘤及抗病毒功能性食品和药物是当今研究的重点。槲寄生(Viscum coloratum (Kom.)Nakai)是一种具有多种生物学活性的药用植物,其活性成分例如生物碱、多糖也被证明具有抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化和抗感染等作用。本研究从槲寄生茎枝中分离纯化得到三种槲寄生多糖级分,并对其抗病毒及抗肿瘤活性机制进行研究,通过蛋白质组学及生物学信息学技术分析多糖作用下差异表达蛋白参与的代谢通路及相互作用关系。本研究的主要内容如下：(1)本研究利用水提醇沉方法从槲寄生茎枝中提取出一种槲寄生粗多糖,经DEAE-纤维素分离纯化后得到三种槲寄生多糖级分,命名为VCP1,VCP2和VCP3。SepharoseCL-6B凝胶过滤层析测定分子量,HPLC法分析单糖组成,VCP1分子量为32 KDa,由Glc(30.6%),Gal(34.3%),Ara(14.9%),Rha(1.7%), Man(18.5%)组成；VCP2分子量为280 KDa,由Glc(8.4%),Gal(14.5%),Ara(43.2%),Rha (6.3%),Man(7.0%),GlcA(1.8%),GalA(18.8%)组成；VCP3分子量为21KDa,由Glc(5.6%),Gal(10.5%),Ara(33.3%),Rha(13.8%),Man (4.4%),GlcA(1.3%),GalA(31.1%)组成。紫外光谱显示多糖级分中不含蛋白质和核酸。VCP1,VCP2和VCP3的旋光度分别为-0.163、1.234和0.395,比旋光度分别为-2.040、40.726和65.833。红外光谱(FT-IR)和核磁共振谱(NMR)检测三种多糖级分的结构,VCP2的结构进一步用甲基化法表征。三种多糖级分都具有糖类物质特征吸收峰,VCP1为中性多糖,VCP2和VCP3为RG-Ⅰ型果胶。VCP2主要由GalA、 Gal和Ara组成,GalA和Rha分别以α-1,4-GalA和α-1,2-Rha的形式连接构成主链,Ara和Gal则分别以阿拉伯聚糖和半乳聚糖的形式连接在Rha上形成侧链。VCP2中的GalA被高度甲酯化,酯化度约为50%,几乎没有乙酰化。(2)经CCK-8法测定槲寄生多糖三种级分能够抑制HepG2.2.15细胞增殖,其中VCP2活性最强。FQ-PCR法检测VCP2能抑制HBV-DNA的复制,ELISA法检测VCP2对病毒HBsAg和HBeAg的分泌有直接抑制作用,且都呈现浓度依赖性,但作用均显著低于阳性对照Lami。因此,可以开发槲寄生多糖级分作为抗HBV的辅助治疗药物,提高疗效。(3)槲寄生多糖三种级分通过CCK-8法检测均能够对HepG2细胞产生增殖抑制作用,呈现浓度依懒性,尤其是VCP2。槲寄生多糖级分VCP2能阻滞细胞周期于G1期,从而抑制肿瘤细胞增殖；且VCP2能诱导肿瘤细胞凋亡。qRT-PCR和Western blot进一步研究发现槲寄生多糖通过上调p21和CyclinD基因表达,而使CyclinE和CDK4表达下调,从而阻滞细胞周期于G1期,抑制HepG2细胞增殖；另外,VCP2能上调Smac和Caspases-3基因,抑制抗凋亡基因Bcl-XL和XIAP表达,从而诱导HepG2细胞凋亡,此过程中Bad作用并不明显(p<0.05)(4)通过iTRAQ技术联合LC-MSMS鉴定HepG2细胞和VCP2作用48 h的HepG2细胞中差异表达蛋白为113种,其中59种蛋白表达上调,54种蛋白表达下调。GO富集得到差异显著的条目(p<0.05)分别为：生物学过程1355项,细胞成分186项,分子功能218项。而KEGG通路富集到27项差异显著的代谢通路(p<0.05)。PPI网络分析揭示了差异表达蛋白相互作用关系,为后续进行筛选肿瘤细胞分子标记物奠定基础。