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目的:通过基因芯片筛选出PGc-1α的新型下游靶基因UPase,然后,研究其分子作用机理。最后,通过过表达PGC-1α研究其下游靶基因UPase的重要生物学功能。
方法:为了证明PGC-1α对Upase诱导表达的机制,克隆了Upase的启动子插入到荧光启动子载体中。经过一系列的5端截短、突变,通过报告基因荧光值的变化找出PGC-1α在Upase的启动子的作用位点,然后,用软件分析Upase的启动子,找出潜在转录因子。通过报告基因基因荧光值的变化找出与PGC-1α共激活的转录因子,用EMSA进行验证实验结果。包装好PGC-1α和与其相互作用的转录因子的腺病毒,转染细胞检测UPasemRNA水平的变化。最后,在细胞水平上研究PGC-1α对Upase重要生理功能的调节。
结果:
1、PGC-1α和ERRs(ERRα和ERRγ)共激活UPase启动子的活性。
2、将ERRE元件进行突变后,PGC-1α和ERRα共激活UPase启动子的活性受到抑制。
3、XCT790(ERRα的抑制剂)抑制PGC-1α和ERRα对UPase启动子的激活作用。
4、ERRα通过ERRE结合于UPase启动子。
5、ERRα和PGC-1α可以共激活促进UPasemRNA的表达。
6、抑制剂XCT790可以抑制ERRα介导的UPase的表达。
7、ERRα和PGC-1α可以共促进UPase的表达增强乳腺癌细胞MCF-7和SK-BR-3对5’-DFUR的敏感性。
结论:发现PGc-1α共激活因子与ERR这个转录因子可相互作用来调节UPase的表达。因而可以增强口服药物5-DFUR(5-FU的前体)对癌细胞的毒害作用。通过分子机理的研究,相信会在以后的临床上会有很重要的意义。