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目的:研究高碳酸血症对机械通气肺损伤导致细胞凋亡的作用及作用机制。
方法:健康成年雄性wistar大鼠48只,体重在250g~310g间,随机分为自主呼吸组(A组)、高气道压力组(B组:维持气道压力30mmHg,保持PaCO2为35~45mmHg)、高二氧化碳保护组(C组高气道压力下,保持PaCO2为80~100mmHg)。采用高吸气压力建立机械通气性肺损伤的模型,通气模式设为PIP=30 cmH2O、PEEP=2 cmH20、I∶E=1∶2、RR=30 次/分、FiO2=0.5。观察4小时,每小时记录血流动力学及血气分析指标。观察结束后,处死动物。使用肺组织制作细胞悬液,分离肺组织单细胞,检测肺组织全细胞中凋亡细胞占总细胞的比例,检测细胞内凋亡蛋白Caspase-3、P-ASK,P-JNK表达的含量。
结果:动脉氧分压(PaO2):A组在4h之内较基础值没有明显变化,B组在4h时PaO2显著降低,与基础值比较有显著差异(P<0.05)。C组的PaO2在4h时明显高于B组(P<0.05)。流式细胞仪检测细胞凋亡比例:C组细胞凋亡比例比A组高(P<0.05),B组细胞凋亡比例与C组相比显著提高(P<0.05)。P-ASK的含量:C组含量比A组高(P<0.05),B组含量与C组相比显著提高(P<0.05)。P-JNK的含量:B组含量比C组显著提高(P<0.05),C组含量比A组轻度提高(P<0.05)。Caspase-3的含量:B组含量比C组显著提高(P<0.05),C组含量比A组轻度提高(P<0.05)。病理分析:B组呈现多种损伤,肺泡壁破裂,肺泡腔内出现渗出液,组织间隙水肿,气管上皮细胞出现脱落,C组与B组相比损伤程度较轻。免疫组化显示B组凋亡主要存在气管上皮,损伤重的在肺泡上皮也有表现,C组凋亡细胞主要存在气管上皮,肺泡上皮少见或未见,A组凋亡细胞主要存在气管上皮,肺泡上皮少见或未见。
结论:机械通气肺损伤能导致细胞凋亡增加,高碳酸血症(PaCO2=80~100mmHg)对细胞凋亡具有抑制作用,其机制可能是通过抑制ASK1-JNK通路对Caspase-3的激活,减少细胞凋亡,从而起到肺保护作用。