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鸭病毒性肠炎(Duck viral enteritis，DVE)，又名鸭瘟(Duck plague，DP)，是由鸭肠炎病毒(Duck enteritis virus，DEV)引起的鸭、鹅及多种雁形目禽类的一种急性、热性、败血性传染病，曾在多个国家和地区发生流行，给养鸭业造成巨大的经济损失。DEV是疱疹病毒科成员，第八次病毒分类报告将其划分为疱疹病毒科未分类病毒。由于DEV分子生物学研究相对滞后，其基因组组成和结构未知，在很大程度上限制了DEV致病机制及该病在防控方面的研究。本研究根据本实验室提交至GenBank上的DEV clone-03部分基因组序列，选择在疱疹病毒中较为保守的囊膜蛋白UL27、主要衣壳蛋白UL19以及在绝大多数疱疹病毒成员基因组排列中保守的基因簇(UL22-TK-UL24)进行测序。选取同源性较高的α-疱疹病毒同源蛋白作为参考毒株，应用DNAStar软件对5个基因进行序列比对，分析各个基因编码蛋白的保守区。结果表明，DEV clone-03 UL19和UL27保守，UL22次之，TK具有胸苷激酶特征性结构域：ATP结合结构域和核苷结合结构域。与HSV-1相似，UL24也存在5个保守位点。UL22和UL27编码的蛋白具有跨膜糖蛋白典型特征，UL22具有7个糖基化位点，6个跨膜区，在N末端1～21位氨基酸为信号肽序列，符合疱疹病毒gH糖蛋白的特点；UL27有9个潜在的糖基化位点，3个跨膜区，符合疱疹病毒gB糖蛋白的特点。此外，根据5个基因编码氨基酸序列进行系统发育进化分析，发现DEV clone-03与马立克病毒属亲缘关系较近，但又形成独立分支。根据这5个基因比较结果，建议将鸭肠炎病毒归类为疱疹病毒科、α-疱疹病毒亚科。为了鉴定DEV clone-03结构基因，将DEV clone-03 UL19基因分成UL19-N、UL19-M、UL19-C三段进行原核表达并制备抗血清。同时表达UL27基因中段UL27-M和UL6基因的UL6-1和UL6-2二段，应用Western blot和间接免疫荧光方法检测6个重组蛋白的单因子血清与DEV clone-03全病毒的反应性。结果表明UL19-N、UL19-M和UL19-C三段蛋白制备的抗血清均能够与全病毒发生特异性反应，在大约150kDa处检测到特异性蛋白条带，大小与DNAStar软件预测的DEVclone-03 UL19蛋白大小一致，说明DEV clone-03 UL19是病毒的结构蛋白，大小约为150kDa，结合与其他疱疹病毒同源蛋白共有的保守区，初步认为DEV clone-03 UL19可能是病毒的衣壳蛋白。应用Western blot方法检测UL27，未能够在DEV clone-03中检测到预期大小的蛋白条带，但是，应用间接免疫荧光方法检测，UL27-M抗血清能够与全病毒发生抗原抗体反应，说明DEVclone-03 UL27是病毒的组成成分，结合与其他疱疹病毒同源蛋白共有的保守区，以及UL27具有跨膜糖蛋白特征，推测DEV clone-03 UL27可能是病毒的囊膜糖蛋白。应用UL6-2蛋白抗血清检测DEV全病毒，在大约88kDa处检测到特异性蛋白条带，与DNAStar软件预测DEV clone-03 UL6蛋白大小一致，结合其他研究报道，初步认为DEV clone-03 UL6是病毒的结构蛋白。应用DNAStar软件对上述检测抗原性较好的DEV clone-03 UL19蛋白从蛋白的亲水性、抗原性以及表面可及性进行表位预测，三段蛋白均存在抗原表位优势区，因此选取UL19-C段蛋白制备单克隆抗体，拟对UL19抗原表位进行初步定位。将UL19-C蛋白作为抗原免疫6-8周龄的BALB／c小鼠，制备单克隆抗体，经过3次克隆，分别采用间接ELISA、Western blot和间接免疫荧光方法筛选，最后得到4株(185、3A1、4F9、6F6)稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。将DEV clone-03 UL19-C分成两段进行表达，N端命名为UL19-C1、C端命名为UL19-C2，二者有16个氨基酸的重叠。Western blot检测，4株单克隆抗体均能够识别UL19-C1蛋白，而不能够与UL19-C2发生特异性反应，说明获得的4株单克隆抗体都是针对UL19-C1蛋白的，即在DEV clone-03 UL19蛋白C端921～1162位氨基酸的片段内有能够被4株单克隆抗体识别的抗原表位。