目的：Bmi-1作为一种原癌基因，它的高表达是肿瘤发生和产生耐药性的重要原因之一。因此，利用RNA干扰技术，通过抑制原癌基因的表达，达到促进肿瘤细胞凋亡的目的，是目前正积极探索的一条新的肿瘤治疗途径。本研究通过构建反义Bmi-1的质粒并转染膀胱癌5637细胞，使其产生的反义mRNA封闭膀胱癌5637细胞中Bmi-1的表达，以观察其对膀胱癌5637细胞生长的抑制作用以及对膀胱癌5637细胞株生物学性质的影响，从而探讨反义Bmi-1抑制膀胱癌5637细胞增殖的作用机理，为膀胱癌的治疗提供新的思路。　　 方法：1.根据siRNA的设计原则、载体的酶切位点、promage公司在线siRNA设计程序以及GenBank中Bmi-1的编码序列，合成针对。Bmi-1核心编码区的寡聚核苷酸片段，并将靶位点的序列、阴性对照的序列和相应的基因组数据库进行比较，排除那些和其他编码序列同源的序列，设计合成相应的小发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）。　　 2.与pGeneClipTM质粒退火连接，构建针对Bmi-1的siRNA重组质粒pshRNA-Bmi-1及阴性对照的重组质粒pshRNA-错配。　　 3.将重组质粒转化进入感受态细胞中，产生大量克隆。　　 4.在体外转染中利用脂质体将重组质粒导入膀胱癌5637细胞中。　　 5.用MTT法检测RNA干扰对膀胱癌5637细胞活力的影响并确定最佳反应条件。　　 6.利用RT-PCR检测Bmi-1的mRSA转录水平的变化。　　 7.倒置显微镜下观察膀胱癌5637细胞形态的改变。　　 结果：　　 1.经电泳确证针对Bmi-1基因的shRNA重组质粒pshRNA-Bmi-1及阴性对照的重组质粒pshRNA-错配构建成功。　　 2.转化感受态细胞成功后生成大量重组质粒克隆　　 3. siRNA干扰Bmi-1基因导致bmi-1基因表达明显减少、细胞凋亡并显著抑制肿瘤细胞的生长。MTT法可见空转染组及pshRNA-错配对膀胱癌5637细胞细胞无显著抑制作用（P>0.05），两组pshRNA-Bmi-1对膀胱癌5637细胞均有明显的抑制作用（P<0.05）；确定阳性处理组半数致死浓度为：1×10-8mmol/L，时间为48小时；两组阳性处理组间抑制率无明显差别（P>0.05）；阳性处理组中膀胱癌5637细胞生长均呈不同程度地减慢，随着时间的延长，抑制率增加，随着浓度的增加，抑制率也得到增加，表现为细胞生长受到siRNA浓度及时间的双重影响；　　 4. RT-PCR后通过图处理软件分析条带的灰度值，可见正常对照组、空白对照组与两组阳性处理组（加入siRNA1组及加入siRNA2组）之间的灰度值比较具有显著统计学意义（P<0.05），而正常对照组、空白对照组、阴性处理组（加入siRNA1-错配1）、阴性处理组（加入siRNA2-错配2）几组灰度值未见明显改变（P>0.05）；　　 5.倒置显微镜下可见正常对照组、空白对照组、阴性对照组膀胱癌5637细胞细胞体外生长活跃，而阳性处理组则细胞生长缓慢。　　 结论：　　 1.构建的两组重组质粒pshRNA-Bmi-1均能够有效地作用于膀胱癌5637细胞，克服了合成RNA成本高费用大、转染率低的缺点，更有利于RNAi技术的推广和应用。　　 2.生物学活性实验证明，siRNA干扰后Bmi-1基因表达明显降低并显著抑制细胞的生长。同时验证了Bmi-1基因的RNA干扰在进行抗肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。