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目的:通过研究大蒜素(allicin)与紫杉醇(paclitaxel,PTX)对ACC-M细胞中CD44、CXCL12、NCAM蛋白表达的影响,探讨大蒜素联合紫杉醇对涎腺腺样囊性癌ACC-M细胞增殖抑制作用及诱导细胞凋亡的作用,为大蒜素联合紫杉醇临床抗肿瘤药物的应用提供理论基础及实验依据。方法:本实验分为大蒜素组(allicin)、紫杉醇组(PTX)、联合用药组(allicin+PTX)和对照组(Control),对照组为含有0.1%DMSO的PBS。(1)CCK-8实验法:设置大蒜素浓度梯度为(20mg/ml,40mg/ml,60mg/ml,80mg/ml,100mg/ml),紫杉醇浓度梯度为(5mg/ml,10mg/ml,20mg/ml,40mg/ml,60mg/ml),分别检测大蒜素与紫杉醇各浓度作用于ACC-M细胞(24h、48h、72h)后增殖抑制率,运用SPSS20.0软件分别计算出大蒜素与紫杉醇48小时半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),分别检测大蒜素IC50、紫杉醇IC50、大蒜素IC50+紫杉醇IC50联合作用于ACC-M细胞48h的细胞抑制率。(2)用流式细胞仪分别检测各浓度(allicin组40mg/mll;PTX组:10mg/ml,20mg/ml;联合组allicin40mg/ml+PTX10mg/ml)作用于ACC-M细胞(24h、48h)后细胞凋亡率。(3)Western blot分别检测(allicin组、PTX组、allicin+PTX组)作用于肿瘤细胞48h后,检测CD44、CXCL12、NCAM蛋白表达水平。(4)RT-PCR检测不同药物组(allicin组、PTX组、allicin+PTX组)作用于ACC-M细胞48h后CD44、CXCL12、NCAM mRNA相对表达量。结果:(1)同一时段内,随着大蒜素与紫杉醇浓度的增加,ACC-M细胞增殖抑制率增加,细胞抑制率与药物浓度呈正相关(P<0.05)。(2)同浓度的大蒜素与紫杉醇处理后,细胞增殖抑制作用随时间的延长而增强(P<0.05)。(3)大蒜素IC50、紫杉醇IC50组分别与联合组抑制率相比,联合用药组细胞增殖抑制率明显强于两者单独用药组,大蒜素与紫杉醇联合应用具有协同增效作用(F=779.469,P<0.05)。(4)流式细胞仪检测发现,大蒜素与紫杉醇均能诱导ACC-M细胞凋亡,联合用药对ACC-M细胞凋亡效应强于单独用药,差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)大蒜素与紫杉醇单独及联合使用均可下调ACC-M细胞中CD44、CXCL12、NCAM蛋白表达量,大蒜素与紫杉醇联合应用对目标蛋白的调控最为显著(P<0.05)。(6)大蒜素与紫杉醇单独及联合使用均可下调ACC-M细胞中CD44、CXCL12、NCAM mRNA相对表达量,大蒜素与紫杉醇联合应用对目标基因的调控最为显著(P<0.05)。(1)结论:(1)大蒜素与紫杉醇可抑制ACC-M细胞增殖,且呈浓度依赖性;大蒜素联合紫杉醇可增强ACC-M细胞的凋亡效率,减少紫杉醇用量。(2)大蒜素与紫杉醇单独及联合使用可下调ACC-M细胞中CD44、CXCL12、NCAM蛋白的表达。