人源静息态胰腺星状细胞的改良分离方法

来源 :安徽医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yyw2dy2001
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:胰腺星状细胞(Pancreatic stellate cells,PSCs)是一种位于胰腺小叶和腺泡周围区域之间的间质细胞。在正常胰腺组织中,PSCs的主要功能是储脂,富含脂滴,内含大量维生素A,增殖缓慢,呈静息态表型。在各种理化因素的刺激下,PSCs激活后可以转化为肌成纤维细胞样细胞。而活化的胰腺星状细胞作为胰腺导管癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)和慢性胰腺炎(Chronic pancreatitis,CP)中胰腺纤维化进程中的主要间质细胞,分泌大量细胞外基质(extracellular matrix,ECM),加速了胰腺疾病的发生发展。随着近年来PSCs领域研究的不断推进,最新的证据发现,PSCs在内分泌细胞功能,胰岛纤维化和糖尿病中也起着重要作用。然而,人源静息态的胰腺星状细胞分离由于胰腺组织的自溶性导致原代细胞成活率和分离成功率不够稳定,所以我们在现有PSCs原代分离的技术上,进一步简化优化了方案,为能够更好的推进胰腺星状细胞领域的研究提供了实验依据。目的:探讨一种简便、高产的人静息态胰腺星状细胞(Normal Pancreatic stellate cells,NPSCs)分离方法,为研究胰腺星状细胞相关实验提供足够数量并可靠的原材料。方法:应用gentle-Macs TM组织处理器对人正常胰腺组织标本进行单细胞悬液制备,提高胰腺单细胞悬液的得率和活率,再使用Percoll密度梯度离心法分离NPSCs。使用台酚蓝染色鉴定细胞活率,紫外激发波长下自发荧光鉴定以及油红O染色法鉴定NPSCs细胞状态。使用细胞免疫荧光法鉴定活化后的人PSCs纯度。使用Western Blot和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术对体外培养3天和10天的PSCs活化标志物进行检测。结果:人NPSCs得率大约(2.75±0.65)×106个/g,细胞活率可达92%,细胞纯度达到95%。结论:本实验采用的方法是一种简便、高产、稳定的分离胰腺星状细胞的方法,值得推广。
其他文献
食管癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,根据病理类型可分为食管鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)和食管腺癌(Esophageal Adenocarcinoma,EAC)。食管癌也是
事实上离散数学大致可以被认为是抽象化了的计算机问题,数据结构与算法设计中都能够体现出离散性。计算机里能够表现离散性的问题有很多,因此计算机科学在研究离散数学时有多
经典的整数阶扩散方程最早由德国生理学家Fick在研究营养物质在生物细胞膜内的传播过程时提出,并随后由Einstein与Pearson分别运用第一性原理和随机游走的方法导出。他们的工
保险素有“社会稳定器”之称,其作为一项分散风险,分担损失的社会制度对人类社会的稳定和发展意义重大。随着生产力的提高和人类社会文明的进步,保险受到越来越多的重视,社会
当前大学生就业形势十分严峻,毕业生的就业压力大。在这种情况下,作为学生和用人单位之间的桥梁,学院的帮扶工作就显得尤为重要。在学院开展的就业帮扶工作中,以学生就业存在
农村老年人能否老有所养是关系到社会稳定、农村深化改革、“三农”问题妥善解决以及实现全面小康社会目标的重要问题。党的十七大明确提出,要加快建设覆盖城乡居民的社会保
目的探讨乳酸杆菌对卵白蛋白致过敏性鼻炎(AR)大鼠的鼻分泌物嗜酸性粒细胞(EOS)、血清中IgE、IL-4和IFN-r含量的影响。方法以OVA为致敏原建立大鼠AR模型,实验分正常组、模型
在过去的20余年里,食管癌总的生存率仍然处于一个较低的水平,在接受根治性切除的食管癌病人中,超过三分之二最后会因复发及远处转移而死亡。在亚洲地区食管鳞状细胞癌(Esopha
为了揭示歧口凹陷古近系岩性地层油气藏分布规律并指导钻探,应用层序地层学理论,结合三维地震、测井和岩心资料对岐口凹陷滨海地区古近系开展了层序地层分析。古近系作为一个
微阵列技术的发展,为基因调控网络的研究提供了数据基础,基因调控网络的构建是功能基因组中一个重要研究课题。基于贝叶斯理论的图模型具有坚实的理论基础、简单明了的知识表