沙棘籽原花青素抗心肌缺血活性成分研究

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沙棘又名醋柳、酸刺,为胡颓子科沙棘属植物。我国不仅是世界上沙棘属植物类群分布最多的国家,而且沙棘的资源蕴藏量也最大。1977年,沙棘作为中药被列入《中华人民共和国药典》。本文以沙棘籽原花青素为研究对象,筛选具有抗心肌缺血作用的组分,并对其中的主要成分进行分离纯化和结构鉴定,为进一步开发利用沙棘籽资源奠定了基础。首先,通过乙醇提取、乙酸乙酯萃取得到沙棘籽总原花青素。使用大孔树脂柱层析将乙酸乙酯萃取物粗分为4个组分。利用乳鼠缺血心肌细胞模型,以不同的组分作为药物进行干预,采用MTT法检测心肌细胞的存活率。结果表明乙酸乙酯萃取物和大孔树脂10%的乙醇洗脱物对缺血心肌细胞损伤有一定的保护作用。其次,利用Sephadex LH-20柱色谱、HW-40柱色谱、ODS柱色谱和MCI柱色谱等手段对大孔树脂10%的乙醇洗脱物进一步分离,洗脱过程采用薄层层析法进行检测,最终得到5个纯化合物,采用核磁共振法鉴定其结构。单体化合物的抗心肌缺血活性测定结果表明,表棓儿茶素和儿茶素是沙棘籽原花青素中的主要活性成分。再次,以沙棘籽原花青素得率为指标,通过单因素实验和正交实验对提取工艺参数进行优化。选定水作为提取剂,最佳提取方案是:提取温度50℃,料液比1:10,提取时间1h,提取次数3次。最后,对沙棘籽原花青素大孔树脂纯化工艺进行了研究,结果表明AB-8具有较好的吸附和解吸能力,上样浓度控制在30mg/mL左右为宜,依次用1BV的水和2.8BV的10%乙醇可以得到纯度较好的沙棘籽原花青素,大孔树脂AB-8在使用4次后需进行再生处理。
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