【摘 要】
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禽流感(Avian Influenza)是由甲型流感病毒引起的一种急性传染病,禽流感病毒具有传播范围广,致病与致死率高的特点,不仅给养殖户造成了重大损失,而且对人类健康构成了极大的威胁。2013年3月31日,首次报道了H7N9禽流感病毒感染人的病例。作为传统禽流感疫苗生产技术的一个有效补充,本论文基于酿酒酵母表面展示技术构建H7N9口服疫苗,并对其免疫原性进行了考察。以A/Anhui/1-DEWH
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禽流感(Avian Influenza)是由甲型流感病毒引起的一种急性传染病,禽流感病毒具有传播范围广,致病与致死率高的特点,不仅给养殖户造成了重大损失,而且对人类健康构成了极大的威胁。2013年3月31日,首次报道了H7N9禽流感病毒感染人的病例。作为传统禽流感疫苗生产技术的一个有效补充,本论文基于酿酒酵母表面展示技术构建H7N9口服疫苗,并对其免疫原性进行了考察。以A/Anhui/1-DEWH730/2013(H7N9)(基因库编号:CY187618)的血凝素(hemagglutinin,HA)作为研究对象,以表面展示质粒pYD5为骨架,构建重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA。通过Western blot分析,检测HA蛋白的特异性表达;通过免疫荧光标记和流式细胞仪分析,检测HA蛋白的表达位置以及展示效率;通过间接ELISA,对重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA表达的HA蛋白进行定量分析。以SPF级BALB/c小鼠作为动物模型,考察重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA经口服免疫后的免疫原性。通过ELISA和ELISpot分别检测重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA诱导的特异性血清Ig G效价以及IFN-γ/IL-4的分泌水平;通过HI实验,检测重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA诱导的血清HI效价。H7N9 HA蛋白可以稳定、高效地表达在重组酿酒酵母EBY100的表面。1 OD600nm的重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA表达出10μg的HA蛋白。进一步地,重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA经口服免疫BALB/C小鼠后,诱导有意义的体液免疫应答、细胞免疫应答以及血清HI效价,这为评价重组酿酒酵母EBY100/pYD5-HA的免疫原性提供重要的数据支撑。最终研发出以酿酒酵母表面展示系统为递送载体的H7N9口服疫苗,为将来H7N9口服疫苗进入临床前期大型动物试验或临床试验提供可行的方案和可靠的实验支撑。这一通用技术平台的建立将为世界防控禽流感提供强有力的保障,也为设计和研发其它重要及烈性传染病口服疫苗提供新的思路和策略。
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