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目的:1.掌握软骨细胞体外三维培养技术,掌握自体关节软骨缺损模型的建立及自体软骨细胞移植加骨膜覆盖技术。2.研究了解在体外三维培养条件下的软骨细胞,对关节软骨缺损模型的短期修复效果。3.为临床开展自体软骨细胞移植,治疗关节软骨损伤提供一个基础性研究。方法:1.自体软骨细胞的来源取四周龄新西兰兔,腹腔全麻后,无菌条件下片状切取一侧膝关节股骨髁部软骨,用机械和酶消化法获得单个软骨细胞,细胞悬液,进行体外三维培养。2.自体软骨细胞的移植取三维培养的自体膝关节软骨细胞,消化成单个软骨细胞后,将细胞悬液注入兔膝关节缺损处,采用自体同侧胫骨上端内侧骨膜覆盖。3.试验分组:按试验方法分为四组:自体软骨细胞移植组、自体对照组(单纯骨膜覆盖)、异体对照组(单纯骨膜覆盖)及异体对照组(无骨膜覆盖)。按动物数量分组:选24只健康新西兰大白兔,体重为2.0～2.5 kg,随机分为4组,每组6只。4.试验用关节软骨缺损模型设计:试验组及自体对照组:于兔左膝关节股骨髁髌股关节面转2孔直径5mm的全层软骨缺损,上孔用于自体对照,下孔用于自体软骨细胞移植。异体对照组:转孔方法同前,上孔仅行骨膜缝合覆盖,下孔骨膜不缝合,不行细胞移植。5.组织学评价:分别于术后4、8、12、16周施行空气栓塞杀死各组家兔,切取股骨远端(包括缺损修复组织、邻近软骨和骨)。用于大体观察,并对组织切片行II型胶原免疫组化染色及HE染色。结果:1.利用机械与酶消化法获得的软骨细胞,成功的进行了体外单层及三维培养,构建了稳定的软骨细胞体外三维培养体系。2.成功的进行了自体关节软骨缺损模型的建立及自体软骨细胞移植加骨膜覆盖技术。3.体外三维培养条件下的自体关节软骨细胞,对关节软骨缺损模型的短期修复效果良好,组织学评价明显优于对照组。结论:1.利用体外三维培养的方法在短期内能够获得较大数量表型稳定的自体关节软骨细胞。2.自体软骨细胞移植加盖骨膜覆盖技术修复关节软骨缺损短期效果良好,能较好的修复关节软骨缺损。