柑橘黄化脉明病毒在尤力克柠檬中的时空分布及细胞结构变化研究

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由柑橘黄化脉明病毒(Citrusyellow vein clearing virus,CYVCV)引起的柑橘黄脉病严重危害着酸橙、柠檬等。近年来在我国云南、四川、重庆等地发生及传播,阻碍柠檬产业的发展。国内外研究表明,CYVCV是一种典型大小为13~14 nm×685 nm的细丝状病毒粒子,感染该病害的柠檬和酸橙植株春秋症状显著,而夏季和冬季一般不显症。本研究旨在探索简便的CYVCV病毒粒子提纯方法,并利用RT-PCR和qRT-PCR技术检测该病毒在尤力克柠檬寄主叶、皮和根组织中的分布规律及其在不同寄主中的相对表达含量差异,同时利用光学显微镜及电子显微镜观察该病毒在叶片组织细胞中的分布及其诱导的细胞结构变化。  现将本文主要研究结果摘要如下:  1.建立了快速简便的CYVCV病毒粒子提纯方法,观察到12~15 nm×500~800 nm的细丝状病毒粒子,这与文献报道的典型大小和形态基本一致。  2.CYVCV在尤力克柠檬寄主的叶、皮和根中全年均有分布,但分布不均匀,且含量随季节变化差异显著。夏季高温对症状显现、病毒含量均有显著抑制作用,而冬季低温仅抑制症状显现,对病毒含量影响不显著。该病害的最佳检测时期为春秋季节,最佳检测部位为嫩叶,但夏冬季节除嫩皮之外老叶为最佳检测部位。  3.除在尤力克柠檬维管组织韧皮部的筛管细胞中发现了大量分散的病毒粒子外,还在叶肉组织分泌腔的内层细胞中发现了大量聚集或分散的CYVCV病毒粒子。这与 qRT-PCR检测尤力克柠檬叶片的叶肉和侧脉组织中病毒含量较高的结果相一致,且前者的含量高于后者37%左右。  4.CYVCV在不同柑橘品种中的相对表达含量差异较大,但与症状表现关系不大。酸橙和柠檬类症状明显,甜橙类一般不显症,而在前者中CYVCV的相对表达量远低于后者,最高达41倍左右。  5.CYVCV诱导的尤力克柠檬叶片的细胞结构变化,主要表现在:  1)叶肉组织中细胞排列更为紧凑;  2)部分小侧脉的韧皮部塌陷;  3)叶绿体中淀粉粒增多、体积增大;叶绿体外膜囊泡化;细胞质膜内陷;嗜锇颗粒增多;叶绿体伸出伪足状结构将线粒体裹入;  4)细胞质区的病变除细胞中小液泡增多外,主要是膜结构的改变,如出现内含形态各异小泡的多泡体结构、内含纤维状物质的膜性小泡及一些髓鞘样结构;  5)线粒体在部分细胞质中聚集增多,个别解体;  6)其他细胞器存在个别细胞核染色质凝集、内质网膨大、高尔基体结构模糊等病变现象。
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