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本实验对小鼠桑椹胚的玻璃化冷冻保存、胚胎分割及胚胎移植技术进行了系统的研究。 首先对小鼠桑椹胚细管、OPS冷冻法进行了比较研究。采用EFS40细管二步法冷冻,解冻后其囊胚发育率最高为96.40%,优于细管一步法(88.75%),且与对照组(100%)无显著性差异(P>0.05)。OPS法冷冻效果要好于细管法。OPS一步法冷冻后囊胚发育率高达97.92%,与对照组(100%)无显著性差异(P>0.05)。OPS二步法即胚胎预处理30s,然后移入EDFS30冷冻液中平衡25s冷冻保存,解冻后在0.5mol/L蔗糖溶液中平衡5min,培养后囊胚发育率为(100%)。 利用OPS最佳冷冻组获得的183枚胚胎移植给10只假妊娠2.5~3d的受体母鼠,其中5只妊娠,产仔34只,产仔率为41.46%,与对照组产仔率(42.73%,47/110)无显著性差异(p>0.05)。 在胚胎分割试验中,在蔗糖液与进口分割液中分割桑椹胚,成功率显著高于mPBS处理组(69.53%、77.40% vs 56.82%)(p<0.05),但半胚的囊胚发育率及囊胚细胞数三组均无显著性差异(p>0.05)。 新鲜桑椹胚经去致密化处理后分割,其分割成功率、半胚培养后的囊胚发育率都显著高于未处理组。分别为(82.56% vs 57.50%,75.35% vs 50%)(P<0.01)。 对细管法、OPS法冷冻后的胚胎进行分割,二者分割成功率、半胚培养后的囊胚发育率与新鲜对照组无显著性差异(p>0.05),但鲜半胚的囊胚发育率(77.38%)略高于细管法(68.52%)与OPS法(70.22%)。 对OPS法冷冻桑椹胚和新鲜桑椹胚分割后移植,将各自分割所获得的半胚191枚和182枚,分别移植给11只和10只假妊娠2.5~3d的受体母鼠。结果各有5只和4只妊娠,分别产仔15和13只,产仔率为17.65%和18.31%,两者无显著性差异(p>0.05)。