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目的:特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)是特发性间质性肺炎(idiopathic interstitial pneumonia, IIP)中病理表现为普通型间质性肺炎(usual interstitial pneumonia, UIP)的一种类型,是IIP中最常见的一种,其主要病理特征包括肺泡上皮细胞、血管内皮细胞及基底膜的损害,伴有嗜中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞浸润的炎症,以及肺泡Ⅱ型上皮细胞与成纤维细胞的增生,胶原沉积。IPF确切的发病机制尚不清楚,但IPF早期炎性细胞募集到肺组织主要是通过细胞粘附分子产生的,因此粘附分子在IPF形成中发挥重要作用,而CD31(即platelet-endothelial cell adhesion molecule-1, PECAM-1)和CD54(即intercelluar adhesion mole- cule-1, ICAM-1)均属于粘附分子中的免疫球蛋白家族。本文旨在了解博莱霉素致大鼠肺纤维化模型中CD31和CD54的表达情况,探讨它们与肺纤维化发生、发展的关系。材料与方法:选取体重230±10g的清洁级健康、雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(由河北省实验动物中心提供)48只,随机分为两组:博莱霉素(bleomycin, BLM)组与生理盐水(normal sodium, NS)组,每组均为24只大鼠,每组再按第3、7、14、28天时间段随机分为四个小组,各小组均为6只SD大鼠。两组动物均在无菌条件下操作,用10%水合氯醛(40mg/kg)腹腔注射麻醉,作颈正中切口,充分暴露气管,经环状软骨下气管间隙穿刺向气管内缓慢注入药液(模型组注入含BLMA5 5mg/Kg的生理盐水,而生理盐水组注入单纯的生理盐水)0.2ml～0.3ml,将大鼠直立并轻轻旋转动物,使药液在肺内分布充分、均匀。两组动物在造模后第3、7、14、28天处死,左肺用2.5ml×3次生理盐水做支气管肺泡灌洗(回收率>80%),离心,行细胞计数。将右肺浸泡于10%中性甲醛溶液中固定,做常规石蜡切片,HE染色观察肺泡炎症,Masson染色观察肺内胶原,并按Maeyama方法进行病理分级,观察肺泡炎和肺纤维化的动态变化。免疫组化法观察CD31、CD54在肺内的表达并与支气管肺泡灌洗液细胞总数进行相关性分析分析。采用SPSS 11.5版统计软件处理数据。结果:1大鼠肺组织形态学观察:生理盐水组各时期大鼠肺组织肉眼观粉红色,表面光滑,弹性较好;镜下未见明显变化。博莱霉素组各时期大鼠肺组织肉眼观颜色逐渐变白,出现出血点、淤斑,表面凹凸不平,弹性逐渐减低,硬度增加;镜下可见肺泡炎、肺纤维化程度都明显重于对照组,肺泡炎、肺纤维化第3、7、14、28天差异显著(P<0.05),第7天肺泡炎程度最重,第28天肺纤维化程度最重。2支气管肺泡灌洗液中细胞计数及分类:BALF中细胞总数(109/L)博莱霉素组与生理盐水组比较明显增多(P<0.001),7天时博莱霉素组细胞数最多为49.02±5.79,然后细胞数逐渐减少,但28天时细胞总数为15.45±2.80,但与28天生理盐水组(5.10±1.44)比较仍高(P<0.001)。细胞分类中,博莱霉素组的中性粒细胞、淋巴细胞比例较生理盐水组升高(P<0.001),巨噬细胞比例相应降低(P<0.001)。3 CD31在生理盐水组支气管肺组织内皮细胞表达呈阳性,造模后3天表达明显减少,第7天最低,然后逐渐增多,但与生理盐水组比较仍低。3天、7天、14天、28天各时间点博莱霉素组平均灰度值均较盐水组明显升高(P<0.05),其平均灰度值与支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和中性粒细胞数呈正相关,相关系数分别为:r=0.862,P=0.006;r=0.922,P=0.001。4 CD54在生理盐水组支气管肺组织表达呈弱阳性,博莱霉素组支气管肺组织表达均成阳性,表达分布广泛于肺泡上皮细胞、血管内皮细胞、肺泡巨噬细胞、支气管上皮细胞,在造模后第七天达到高峰,然后逐渐下降,但仍高于生理盐水组。3天、7天、14天、28天各时间点博莱霉素组平均灰度值均较生理盐水组明显减低(P<0.05)。其平均灰度值与支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和中性粒细胞数呈负相关,相关系数分别为:r=-0.832,P=0.010;r=-0.863,P=0.006。结论:1本实验成功的建立了博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化模型,此模型稳定性和预见性好、成功率高、操作简单,是目前肺纤维化研究较好的模型之一。2 BLM致大鼠肺纤维化组织中存在CD31的表达减少,CD31表达减少导致血管通透性增加,促进大量的白细胞渗出及导致内皮细胞损伤、凋亡,参与了肺泡炎及随后的纤维化形成。3 BLM致大鼠肺纤维化组织中存在CD54的表达上调,表达上调的CD54促使炎性细胞在肺内聚集,参与了肺泡炎及随后的肺纤维化形成。