【摘 要】
：
食源性活性肽由于来源广泛、无毒副作用和成本低廉而成为慢性疾病防治领域的研究热点。有研究证明酸驼乳具有调节血压、降血糖等多种生活性。近年来,有关鲜驼乳和发酵驼乳在辅助治疗糖尿病和高血压方面的研究逐渐增多,但是研究发酵乳的生物活性与发酵菌种之间关系的报道却较少。本研究利用来自传统发酵乳的乳酸菌和酵母菌发酵驼乳,筛选出高产血管紧张素转化酶（ACE）和二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制肽的菌株,分离、鉴定和合
论文部分内容阅读
食源性活性肽由于来源广泛、无毒副作用和成本低廉而成为慢性疾病防治领域的研究热点。有研究证明酸驼乳具有调节血压、降血糖等多种生活性。近年来,有关鲜驼乳和发酵驼乳在辅助治疗糖尿病和高血压方面的研究逐渐增多,但是研究发酵乳的生物活性与发酵菌种之间关系的报道却较少。本研究利用来自传统发酵乳的乳酸菌和酵母菌发酵驼乳,筛选出高产血管紧张素转化酶（ACE）和二肽基肽酶Ⅳ（DPP-Ⅳ）抑制肽的菌株,分离、鉴定和合成了具有活性的小分子肽,并对其抑制机制进行了初步探索,为发酵驼乳降血糖和降血压机制的研究提供重要数据。获得研究结果如下:1.活性乳酸菌与酵母菌的筛选及鉴定根据菌株在驼乳中的生长情况对来自内蒙古传统发酵乳的173株乳酸菌和70株酵母菌进行筛选,得到能在驼乳中生长发酵的141株乳酸菌和62株酵母菌,并测定了发酵驼乳的抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶、ACE和DPP-Ⅳ抑制活性。初筛到ACE抑制活性较高的5株乳酸菌和4株酵母菌,DPP-Ⅳ抑制活性较高的5株乳酸菌和3株酵母菌。以ACE和DPP-Ⅳ抑制率为指标,将初筛的菌株进行组合发酵得到ACE和DPP-Ⅳ抑制率较高的发酵组合,乳酸菌L108菌株和酵母菌Y15。测序后的序列比对和系统发育分析可得L108为乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）和Y15为解脂耶氏酵母（Kluyveromyces marxianus）。2.乳酸菌和酵母菌共发酵驼乳产ACE和DPP-Ⅳ抑制肽的条件优化通过单因素和响应面试验,确定了L108和Y15共发酵的最优条件为温度30℃、发酵时间87 h、转速153 rpm。最优条件下发酵驼乳的ACE抑制率比L108单独发酵提高了35.44%,比Y15单独发酵提高了20.12%;DPP-Ⅳ抑制率比L108单独发酵提高了30.55%,比Y15单独发酵提高了17.24%。在驼乳的共发酵体系中,Y15的活菌数比单菌发酵增加了1.8%,L108的生长代谢对Y15起到促进作用。共发酵驼乳进行体外模拟胃肠消化后活性显著提高,ACE的半抑制浓度由15.349 mg/m L降至2.825 mg/m L;DPP-Ⅳ半抑制浓度由30.12 mg/m L降至6.82mg/m L。3.ACE与DPP-Ⅳ抑制肽的分离、鉴定及合成（1）用截留超滤、葡聚糖凝胶色谱和RP-HPLC分离纯化发酵驼乳产生的ACE和DPP-Ⅳ抑制肽。截留超滤膜分离到的<3 KDa组分ACE和DPP-Ⅳ抑制率均最高;选取<3 KDa的组分用AKTA葡聚糖G-10凝胶色谱分离,得到ACE抑制率最高的3号峰和DPP-Ⅳ抑制率最高1号峰;分别选取两个组分用半制备RP-HPLC进一步分离纯化,最终分离到ACE抑制率最高的单峰5-2和DPP-Ⅳ抑制率最高的单峰D3-2。（2）对分离到的单峰序列进行鉴定,并通过BIOPEP及BIOWARE预测了肽序列的ACE和DPP-Ⅳ抑制活性,选择评分较高的ACE抑制肽VFGK、VYPYYG和DPP-Ⅳ抑制肽PHPALLAP、FGGY进行合成。体外测定ACE抑制肽VFGK和VYPYYG的半抑制浓度分别为1067±0.45μmol/L和484±0.98μmol/L,均为竞争性抑制;DPP-Ⅳ抑制肽PHPALLAP和FGGY的半抑制浓度分别为920±0.49μmol/L和1946±0.58μmol/L,也均为竞争性抑制。（3）采用分子对接技术分析了合成肽VFGK、VYPYYG与ACE之间的相互作用位点与作用力;合成肽PHPALLAP、FGGY与DPP-Ⅳ之间的相互作用位点与作用力,结果表明氢键是抑制肽与两种酶结合的主要驱动因素。其中,VFGK与ACE酶的His344、Glu372和His348相结合形成了3个氢键,且与ACE酶活性位点Zn2+结合也形成了氢键;VYPYYG与ACE酶的His314和Met184相结合形成了2个氢键,且与ACE酶的Pro368、Arg479共同结合形成了氢键。FGGY与DPP-Ⅳ酶的Ser1318、Glu893、Glu894和Tyr1350相结合形成了5个氢键;PHPALLAP与DPP-Ⅳ酶的Arg1248相结合形成了氢键,且与DPP-Ⅳ酶活性位距离较近可能存在范德华力。
其他文献
Bessel光束因其独特的传输特性和分布特征而获得广泛应用,轴锥镜因转换效率高而广泛用于产生Bessel光束。尽管目前已有大量关于Bessel光束的相关研究,并取得了很多突破性进展,但有关轴锥镜后方的光波场分布,几乎都限于用衍射积分去描述,尤其是在菲涅耳衍射区,因积分结果无解析表达,所以只能用数值计算的办法去近似描述衍射场在某一特定横截面上的分布,计算过程中还涉及到抽样和算法的诸多限制,这对于轴锥
改革开放之后中国从计划经济时代解放出来,过去特有的“单位制”的解体也带来了社区“单位认同”的消解。随之而来的问题是“单位认同”丧失的同时新的社区认同却没有建立起来。失去认同的老旧社区中居民关系涣散、人际冷漠,居民以各自为利的方式侵食着社区公共资源,这些问题继而造成了社区不同程度的衰败。在一些单位倒闭而失去经济支持进行物质环境维护的社区,随着环境的进一步恶化,其中高能力的居民逐渐迁出社区另择新居、而
1型糖尿病（Type 1 Diabetes Mellitus,T1DM）是一种器官特异性的胰岛β细胞不可逆损伤而导致的自身免疫疾病,目前尚无有效方法根治。间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cells,MSCs）具有多向分化潜能、独特的免疫调节和旁分泌功能,为人类重大疾病的治疗提供了广阔的应用前景。研究表明3D培养的MSCs具有更好的存活能力、免疫调控能力和旁分泌能力。因此,本研究目的
四逆散是经典复方中药,由柴胡、芍药、枳实、甘草组成。其药理作用包括催眠、抗抑郁、增强胃肠动力、抗溃疡、保肝等,复方用药是中医治疗疾病的显著特点,而复方中所包含的各种化学成分又是其药效的物质基础。中药血清药物化学理论认为:中药经过胃肠道代谢后,其化学成分数目急剧减少,更加容易确定中药的活性物质,从而明确药物作用靶点。前人研究证明辛弗林、芍药苷、甘草酸、新橙皮苷、柚皮苷、橙皮苷、柴胡皂苷、芍药苷、甘草
Neurexophilin4（NXPH4）是一种神经突触的分泌蛋白,属于Neurexophilin（NXPH）家族。其家族蛋白最早被认为是一种神经糖蛋白,其成熟肽分子量为29 k D,因其与神经元表面蛋白（neuronal membrane proteins）Neurexin Iα紧密结合而命名,在神经系统中大量表达。目前发现NXPH4在胶质瘤,肝癌,非小细胞肺癌,结直肠癌,乳腺癌,以及其他多种癌
酱头是蓼科何首乌属植物齿叶蓼[Fallopia denticuta（Huang）A.J.Li]的块根,是云南彝族一种常用中草药,其对于痢疾、腹泻、消化不良、慢性肝炎、胃病等疾病具有较好的疗效,尤其在治疗胃病方面效果显著,但目前对于其治疗胃病的机理及其药理活性成分的研究较少,所以,本文将对酱头抗胃溃疡活性、抑菌活性、化学成分等进行研究,为探究酱头的药理活性及其与化学成分的关系提供了一定的理论基础。具
在中国老龄化的大势下,老年人已经成为城市公园绿地的主要使用者,城市公园对于丰富老年人日常生活能起到重要的促进作用。本文以昆明城市公园中老年人活动频率高的空间为研究对象,尝试提出基于微气候适应性设计机理的老龄化公园景观设计策略。本研究首先通过对老年人群活动行为进行实地调研获得老年人活动喜好及规律,据此总结提炼出与老年人活动行为相关的景观要素。并对上述总结选取的公园活动空间进行微气候实测,基于实测结果
1905年昆明自开商埠,1910年滇越铁路建成通车,加快了昆明近代化工业的发展进程,经过漫长的孕育时间留下了许多风格独特、价值珍贵的工业建筑遗产。在当前城市化进程及工业转型提升的大背景下,许多工业遗产被忽视或正遭到不同程度破坏、损毁,其重要的原因即在于工业建筑遗产的价值得不到真正的认知,没有针对性的评估方法。只有基于对昆明近代工业建筑遗产各方面的价值充分把握的基础上,建立准确、适用的昆明近现代工业
环糊精因其具有分子识别、易衍生化、经济环保和生物安全等特性已经被广泛应用于药物载体和超分子催化等领域。在药物载体领域,环糊精作为天然低聚糖分子,具有较好的水溶性,其羟基易衍生与难溶性药物共价结合形成药物-环糊精偶合物进而提高药物的水溶性、稳定性以及生物利用度。在超分子催化领域,环糊精以类似于天然酶的形式用于水相催化。其空腔能够包合疏水性底物,形成特定的主-客体包合物,固定底物的空间位置并利用羟基或
呼吸道感染（Respiratory tract infections,RTI）是医院最常见的高度传染性疾病,还常伴有流感及流感样疾病的发生。逐年上升的发病率和死亡率使呼吸道感染成为了全球性问题。呼吸道最初被认为是无菌的,但是随着研究的发现,呼吸道中存在大量定植的共生微生物,且对人体健康有很大影响。人类处于正常生理状态时,呼吸道中的共生菌相互制约使其维持在某个相对平衡的状态。对于新生儿,这种稳态受生