【摘 要】
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目的采用核磁共振代谢组学技术研究脊髓损伤模型大鼠的代谢组学特征及生物标志物,验证代谢组学技术应用于脊髓损伤研究的可行性;研究芒针干预对急性脊髓损伤大鼠的代谢物质变化的影响;进一步明确芒针在急性脊髓损伤治疗中的作用及其作用机制。方法采购8周龄清洁级雄性SD大鼠20只,体重200g-220g,按照随机数字法分为假手术组和模型组,每组10只,脊髓损伤模型按照改良的Allen’s法制作,假手术组只打开椎板
【基金项目】
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浙江省自然基金《芒针促进急性脊髓损伤修复的代谢组学研究》(No.Y15H270007); 浙江省中医药科技计划项目《基于核磁共振代谢组技术研究芒针促进急性脊髓损伤修复的神经可塑机制》(No.2015ZZ017);
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目的采用核磁共振代谢组学技术研究脊髓损伤模型大鼠的代谢组学特征及生物标志物,验证代谢组学技术应用于脊髓损伤研究的可行性;研究芒针干预对急性脊髓损伤大鼠的代谢物质变化的影响;进一步明确芒针在急性脊髓损伤治疗中的作用及其作用机制。方法采购8周龄清洁级雄性SD大鼠20只,体重200g-220g,按照随机数字法分为假手术组和模型组,每组10只,脊髓损伤模型按照改良的Allen’s法制作,假手术组只打开椎板,不打击损伤脊髓。造模完成后的第1、5、7天采用BBB运动功能评分法进行行为学观察,术后第7天收集脊髓组织作病理学观察,采用核磁共振代谢组学技术对所有大鼠的血清和脊髓样本进行代谢组学分析。在上述实验的基础上,取36只大鼠随机分为假手术组、模型组和芒针结合电刺激组(电针组)每组12只,假手术组不损伤脊髓,制作大鼠急性脊髓不完全损伤模型,造模成功后刺激秩边和水道穴,连续治疗7天,收集大鼠血液、脊髓、脑皮质组织,取损伤脊髓上段做病理观察,获取一维1H NMR谱,借助模式识别方法分析各组间的代谢差异。结果模型组与假手术组相比,代谢组学分析表明,模型组血清中极低密度脂蛋白、低密度脂蛋白、谷氨酰胺、柠檬酸、二甲基甘氨酸等物质和脊髓中谷胱甘肽、3-羟基丁酸、N-乙酰天冬氨酸、磷酸胆碱、谷氨酸、抗坏血酸等物质浓度有明显变化(p<0.05)。在假手术组、模型组和电针组的比较中,芒针秩边和水道对脊髓损伤大鼠的脑皮质代谢物有明显的影响,与模型组相比,电针组的异亮氨酸、谷氨酸,肌醇、N-乙酰天门冬氨、甘油磷脂胆碱、抗坏血酸、乳酸、苏氨酸、肌酐等物质浓度有所恢复(p<0.05);在血清和脊髓样本的代谢物比较中,与模型组相比,电针组血清中的极低密度脂蛋白、柠檬酸、谷氨酰胺等代谢物和脊髓中的谷氨酸、抗坏血酸、肌醇、乙醇胺等代谢物浓度有了明显的恢复(p<0.05),更接近假手术组的代谢水平。结论通过对假手术组和模型组大鼠血清和脊髓样本进行代谢组学检测和分析得到了两组样本的差异性代谢物质,有助于解释急性脊髓损伤后血清和脊髓组织中的特异性小分子物质的变化规律。芒针结合电刺激对脊髓损伤大鼠的脑皮质代谢分析表明针刺穴位所产生的信号可能通过中枢(脑皮质),从而对机体产生相应的调控作用,促进脊髓损伤模型大鼠大脑的能量代谢及能量利用,从而发挥神经元保护作用,对神经传导通路也起了积极作用。从血液和脊髓的代谢物中可以看出刺激秩边和水道穴可通过调节脂类和能量等代谢通路促进急性脊髓损伤的修复。这项研究验证了秩边和水道穴在急性脊髓损伤中的治疗效果以及基于核磁共振的代谢组学在脊髓损伤研究中的适用性。
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