论文部分内容阅读
目的研究基础转录激活因子1(activator of basal transcription 1,ABT1)在胃癌组织中的表达和临床意义及其与胃癌发生发展的关系;探讨ABT1过表达对胃癌细胞生长迁移的影响,为胃癌早期临床诊断提供实验依据。方法1.ABT1在胃癌组织的表达与分析:采用免疫组化SP法检测ABT1在100例人胃腺癌组织芯片样本TMA中的表达情况以及80例与胃癌组织相配对的相邻胃组织的表达情况,分析ABT1在胃癌组织标本中的表达水平与胃癌临床病理特征以及预后的关系。2.细胞株筛选实验:体外培养人胃粘膜上皮细胞系GES-1、中等分化胃腺癌细胞株SGC-7901及低分化的胃癌细胞株BGC-823细胞。用Western Blot法检测ABT1在3种细胞中的基本表达。3.构建过表达质粒pc DNA3.1-ABT1-myc。小鼠ABT1全长序列的扩增,pc DNA3.1/myc-ABT1真核表达载体的构建和鉴定。4.基因转染:培养BGC-823胃癌细胞,观察ABT1基因上调对胃癌细胞株增殖迁移的影响。转染实验分为未处理组、空载体转染组、ABT1基因转染组。Western blot方法检测各组细胞ABT1蛋白的表达。5.采用MTT法检测各组细胞增殖情况。6.划痕实验检测各组细胞迁移能力。结果1.ABT1在胃癌组织的表达及意义:ABT1主要分布在胃癌和癌旁组织的细胞核和细胞浆中,且胃癌组织中ABT1的表达低于癌旁组织中的表达(p=0.021)。胃癌组织中ABT1蛋白表达与病理分级呈显著负相关(p=0.026)。Kaplan–Meier生存曲线分析显示高表达ABT1的胃癌患者与预后良好呈正相关(p<0.0001)。此外,胃癌患者高表达ABT1的生存率比低表达ABT1的患者明显升高(p=0.0272)。2.细胞株筛选:Western Blot结果表明,BGC-823细胞中ABT1的蛋白表达明显少于GES-1及SGC-7901细胞(p<0.01),因此后续实验选取BGC-823细胞。3.ABT1基因转染:PCR鉴定和测序分析表明pc DNA3.1-ABT1-myc重组质粒构建成功。将该质粒转入BGC-823细胞后,与未转染组相比,空载体转染组ABT1蛋白表达无明显区别(p>0.05),ABT1转染组ABT1蛋白表达明显升高(p<0.01),表明ABT1基因转染成功。4.ABT1基因上调抑制胃癌细胞株增殖迁移:MTT结果表明,ABT1转染组细胞增殖率在24 h、48 h和72 h明显少于空载体对照组(p<0.01)。划痕实验结果表明,与对照组相比,ABT1转染组明显抑制BGC-823细胞的迁移(p<0.01)。结论1.ABT1的异位表达在胃癌的发生发展中起着重要作用。低表达ABT1和胃癌患者的不良预后呈正相关,而ABT1蛋白表达高的胃癌病人拥有更长的总生存期。2.过表达ABT1抑制人低分化BGC-823胃癌细胞株的增殖和迁移,其机制需要进一步探讨。