论文部分内容阅读
研究背景 视网膜变性（Retina degeneration,RD）是一类神经退行性疾病,是全球视力丧失的主要原因之一。其主要病理特征是视网膜中神经元细胞进行性死亡,表现为视网膜中大量的神经元细胞,特别是感光细胞的丢失,同时在变性过程中,逐步激活视网膜中的小胶质细胞,具体表现为突起的阿米巴样细胞形态和圆形胞体,并逐渐向视网膜外核层迁移,同时分泌大量促进炎症反应的各类因子,进而加速感光细胞丢失。因此,小胶质细胞的激活被认为是视网膜变性疾病中典型病理改变之一。目前无有效的治疗药物和手术手段彻底治疗视网膜变性,可通过营养药物等方式延缓病情的发展。沙苑子是豆科植物类扁茎黄芪（Astragalus complanatus R.Br.）的干燥成熟种子,它在中药中使用广泛。其含有多种氨基酸、总黄酮等有机物,具有抗炎、抗凋亡、抗氧化特征,用于治疗眼暗昏花、肾虚腰痛等疾病。总黄酮是沙苑子中重要的生物活性物,沙苑子苷A在沙苑子黄酮类中含量较高,是沙苑子药理作用的重要成分之一。沙苑子苷A具有保肝抗肝纤维化、抑制炎性因子分泌的作用。目的 明确沙苑子苷A对视网膜变性小鼠视功能的影响;明确沙苑子苷A对视网膜感光细胞活性及凋亡的作用;明确沙苑子苷A对视网膜小胶质细胞数量和促炎因子基因表达的影响。方法 1.沙苑子苷A对RD1视网膜变性小鼠暗适应F-ERG视功能的影响。RD1视网膜变性小鼠出生后第7天时灌胃沙苑子苷A,每次50mg/kg,每天3次。10日后,用闪光视网膜电图（Flash Electroretinogram,F-ERG）检测RD1小鼠的在暗适应下的视功能。a,b波,Ops波幅值统计分析后,用于评估沙苑子苷A对RD1小鼠视功能的影响。2.沙苑子苷A对视网膜感光细胞的作用。RD1视网膜变性小鼠出生后第7天时灌胃沙苑子苷A,每次50mg/kg,每天3次,10天后采用Tunel评估沙苑子苷A对RD1小鼠感光细胞凋亡数量和外核层厚度的影响。在体外培养小鼠视网膜感光细胞系661W细胞,采用H2O2处理661W细胞30分钟后,加入沙苑子苷A培养24小时,采用CCK-8和荧光染色的方法评估沙苑子苷A对661W细胞的活性和凋亡的影响。3.沙苑子苷A对视网膜小胶质细胞的作用。RD1视网膜变性小鼠出生后第7天时灌胃沙苑子苷A,每次50mg/kg,每天3次,10天后评估视网膜小胶质细胞数量和形态,采用RT-PCR检测视网膜组织中IL-1β、IL-6、i NOS、CCL2炎性因子基因表达。体外培养BV2小鼠小胶质细胞系,用LPS处理BV2细胞4小时,再用沙苑子苷A干预24小时,用荧光染色和RT-PCR的方法评估沙苑子苷A对BV2细胞的凋亡和IL-1β、IL-6、i NOS、CCL2炎性因子表达的影响。结果 1.沙苑子苷A可提高RD1小鼠暗适应下F-ERG检测的a,b波,Ops波幅值,提高视网膜的视功能,延缓RD1小鼠变性进程。2.沙苑子苷A可保护RD1小鼠视网膜中结构,降低RD1小鼠变性过程中感光细胞的凋亡数量,维持外核层厚度。沙苑子苷A干预经H2O2处理的661W细胞后,可提高661W的细胞活性,降低661W细胞的凋亡数量。3.沙苑子苷A可减少RD1小鼠变性早期视网膜中激活的小胶质数量,降低了视网膜组织中IL-1β、IL-6、i NOS、CCL2基因表达水平。经LPS处理BV2细胞后,BV2细胞凋亡数量和IL-1β、IL-6、i NOS、CCL2炎性因子基因水平升高,沙苑子苷A干预后,能下调BV2细胞炎性因子的基因水平表达。结论 沙苑子苷A可提高RD1小鼠暗适应下的视功能,减少RD1小鼠中视网膜感光细胞凋亡数量,维持外核层厚度;沙苑子苷A可增强661W的细胞活性,降低661W细胞凋亡数量;降低RD1小鼠视网膜变性早期激活的小胶质数量和炎性因子基因水平,抑制BV2细胞炎症因子的基因水平。