本实验主要应用程序冷冻和玻璃化冷冻两种方法对小鼠桑椹胚和囊胚进行冷冻,探讨不同浓度的乙二醇(EG)和EFS玻璃化液对胚胎发育的影响,并研究胚胎经重复冷冻的可行性及解冻后的发育率。实验结果表明:1.经抗冻保护剂的玻璃化与脱玻璃化试验,EFS20、EFS30和EFS40可以做为小鼠胚胎玻璃化冷冻液。2.经抗冻保护剂的毒性试验表明,作为抗冻保护液基础液的mPBS对胚胎体外发育无不良影响;低浓度的乙二醇(1.8mol/L~3.6mol/L)对胚胎几乎无毒性,但高浓度的乙二醇(4.5mol/L)对胚胎有一定的毒性;在EFS20、EFS30和EFS40中短时间处理(0.5min)对胚胎几乎无毒性,但随着浓度的增加和处理时间的延长,毒性也越来越大。3.经不同浓度的乙二醇程序化冷冻和不同浓度的EFS系列玻璃化冷冻,桑椹胚冷冻解冻后的发育率分别为52.8%~92.5%和78.9%~91.5% ,囊胚分别为38.6%~82.8%和72.5%~81.3%。其中以1.8mol/LEG和EFS30对小鼠的胚胎冷冻效果最好(桑椹胚的发育率分别为92.5%和91.5%,囊胚的发育率分别为82.8%和81.3%)。4.程序化冷冻和玻璃化冷冻两种冷冻方法差异不显著。5.桑椹胚的抗冻性优于囊胚。6.经1.8mol/LEG首次程序化冷冻后再经1.8mol/LEG程序化冷冻和EFS30玻璃化冷冻的发育率,桑椹胚分别为46.7%和53.8%,囊胚分别为26.4%和33.9%;经EFS30首次玻璃化冷冻后再经1.8mol/LEG程序化冷冻和EFS30玻璃化冷冻的发育率,桑椹胚分别为39.4%和41.3%,囊胚分别为29.1%和31.0%。小鼠胚胎经重复冷冻是可行的;重复冷冻还可以做为检验胚胎耐冻性、冷冻方法和冷冻保护剂的一种手段。