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近年来糖尿病发病率的迅速增长，糖尿病肾病已成为进展至终末期肾脏病的主要原因之一，目前糖尿病肾病的发病机制尚未完全明确，也无特效药物可以逆转其进展，探寻其有效治疗方案已成为亟待解决的公共卫生问题。 足细胞是终末分化的脏层上皮细胞，包绕在肾小球基底膜的最外层，以足突相互连接，足突之间的裂孔隔膜是防止蛋白滤过的重要分子屏障，也是肾小球滤过的最后一道屏障。同时足细胞又是毒素、免疫、代谢和氧化应激的主要靶点，当足细胞损伤时，临床以蛋白尿为主要特征，病理则出现足细胞肥大、脱失、萎缩，肾小球硬化、基底膜增厚。因此，如何逆转和延缓肾小球损伤在糖尿病肾病的进程有着重要意义。 许多学者从凋亡、自噬、氧化应激、线粒体损伤等方面对足细胞损伤进行了研究，但其机制目前尚未完全阐明。此前多认为足细胞凋亡、脱失、数目减少是造成裂孔隔膜破坏、滤过屏障功能受损、蛋白尿产生的主要原因。最近的研究表明足细胞在数目减少前就已经出现功能性变化，数目减少与足细胞形态变化同步出现，尿检中发现脱落的足细胞尚有活性，提示足细胞形态变化可能与足细胞功能损害有关。上皮间充质转化(Epithelial mesenchymal transition，EMT)，即分化的足细胞形态、功能向间充质细胞转化的过程，伴随上皮细胞标记物，如P-钙粘蛋白(P-cadherin)、紧密连接蛋白-1(Zonula occludens1，ZO-1)表达减少，间充质细胞标记物，如纤维母细胞表面蛋白(Fibroblast surface protein，FSP)，α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，波形蛋白(desmin)表达增加，同时维持足细胞形态的裂孔隔膜蛋白表达减少，如podocin、nephrin。这一现象为形态变化在足细胞滤过屏障功能受损中所起作用提供了理论依据。 Wnt家族是一组分泌型糖蛋白，在细胞增殖、极性方面发挥着重要作用。Wnt在高糖刺激早期即可发生表达改变，并与蛋白尿的严重程度相平行，当用Dickkopf1阻断Wnt可缓解足细胞损伤。Wnt信号进入胞内后，将信号传递给Dishevelled(Dsh)，活化的Dsh抑制由轴蛋白（Axin）、腺瘤性结肠息肉蛋白(adenomatous polyposis coli，APC)和糖原合成激酶3β(serin/threonine glycogensynthasekinase3β，GSK-3β)组成的复合物的活性，使β-catenin不能被GSK-3β磷酸化而在胞浆内积聚，并移向核内。当游离的β-catenin进入细胞核内，即可与转录因子T细胞因子/淋巴因子增强子(T-cellfactor/Lymphoid enhancer factor，TCF/LEF)结合，激活TCF转录活性，调节下游靶基因的表达。高糖通过介导TGF-β1分泌，诱导Wnt/β-catenin信号通路持续活化，上调的β-catenin水平诱导足细胞形态改变发生EMT，引起蛋白尿和肾脏纤维化进程。 基于以上实验事实，我们利用体外培养的足细胞，研究高糖条件下足细胞的改变，为探讨糖尿病肾病中足细胞损伤与形态变化、Wnt/β-catenin通路间的关系，并乌索酸治疗的潜在机制，为临床治疗提供理论依据。 方法： 1、高糖培养足细胞24h、48h、72h，并加入不同浓度乌索酸，倒置显微镜观察各组间足细胞形态，计算足细胞发生EMT的比例。 2、将体外培养的足细胞分为四组:正常糖培养组(5.5mM Glucose)、高渗对照组（5.5mM Glucose+19.5mM Manniol）、高糖培养组(25mM Glucose)、乌索酸治疗组(25mM Glucose+5μM UA)，培养48h后，双标免疫荧光检测podocin、ZO-1、α-SMA的蛋白表达，Real-time PCR检测Wnt1、Wnt3a、Wnt5a、Wnt5b、β-cateninmRNA的表达，Western blot检测β-catenin、pho-β-catenin、GSK-3β的蛋白表达。 结果： 1、足细胞形态变化:正常糖组足细胞呈不规则的树枝状，高糖条件下足细胞向鹅卵石、细长状态的间充质细胞形态转化。高糖组足细胞发生EMT比例，乌索酸治疗组足细胞EMT比例减少。 2、与正常糖组相比，高糖组免疫荧光显示裂孔隔膜蛋白podocin表达减少，ZO-1表达减少，α-SMA表达增加，乌索酸能抑制高糖诱导的EMT蛋白表达，增加podocin表达。 3、高糖组作用6h，即可显著下调足细胞Wnt5a mRNA表达，且呈时间依赖性增加。Western blot检测高糖诱导足细胞GSK-3β和pho-β-catenin表达降低，β-catenin表达增加。乌索酸可增加Wnt5a mRNA，GSK3β蛋白表达，降低pho-β-catenin、β-catenin蛋白表达。 结论： 1.高糖条件下，足细胞由正常的树枝状向梭形转化，足细胞裂孔隔膜蛋白podocin表达下调，ZO-1表达减少，α-SMA表达增加，发生EMT。 2.高糖培养的足细胞Wnt5a mRNA表达显著下调，β-catenin的mRNA和蛋白表达均显著上调，GSK3β表达下降，Wnt/β-catenin信号通路活化。 3.乌索酸减轻足细胞损伤，上调高糖诱导的ZO-1表达下降，下调α-SMA的表达，上调裂孔隔膜蛋白podocin的表达，抑制高糖诱导的足细胞EMT。 4.乌索酸通过上调高糖诱导足细胞内的Wnt5a和GSK3β表达，下调β-catenin的mRNA和蛋白表达，抑制Wnt/β-catenin信号通路活化。