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L-半乳糖酸-1，4-内酯脱氢酶(EC 1.3.2.3,GLDH)是催化植物体内抗坏血酸生物合成最后一步的关键酶。本研究克隆了不结球白菜的GLDH基因cDNA，为利用基因工程提高抗坏血酸含量，增加不结球白菜的营养价值，提高其对氧化胁迫的逆境适应能力奠定基础。 1．以不结球白菜常规品种苏州青和乌塌菜为材料，进行光及黑暗对照处理，研究GLDH活性和维生素C含量的日变化规律。结果表明：随着光照时数的增加，不结球白菜还原型抗坏血酸含量和抗坏血酸总含量增加，GLDH活性的变化趋势与还原型抗坏血酸含量的变化趋势相似；黑暗对照处理的GLDH活性和维生素C含量变化趋势与光处理的不同：不结球白菜GLDH活性可能受光诱导调控。 2．根据花椰菜L-半乳糖酸-1，4-内酯脱氢酶基因的cDNA序列设计特异引物，利用RT-PCR技术从不结球白菜品种苏州青中获得了1779bp的GLDHcDNA片段。根据已知的片段序列设计引物，利用3’RACE和5’ RACE技术，获得了苏州青GLDH基因5’端453bp以及3’端622bp。通过拼接实验获得的不结球白菜GLDH基因cDNA全长2034bp，该基因在GenBank中登录号为AY899298。序列分析表明，该基因cDNA包含一完整开放阅读框，编码601个氨基酸。启始密码子ATG的-3位为A，而且其上游13-15bp有一同框架的终止密码子(TGA)，在3’poly(A)~+区之前25bp有一AATAAA信号，这些都符合有效翻译的基因全长cDNA的特征。该基因含有24bp的5’非编码区和203bp的3’非编码区，推测的GLDH分子量为67，921 Da，等电点为8.66。不结球白菜GLDH氨基酸序列与花椰菜GLDH基因具有97％的同源性，与拟南芥GLDH基因具有89％的同源性，与老鼠的L-古洛糖酸-γ-内酯氧化酶和酵母的L-半乳糖酸-γ-内酯氧化酶氨基酸序列的同源性分别为27.68％和23.66％。不结球白菜GLDH N端114-249是保守的黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)结合结构域。PSORT程序预测不结球白菜GLDH位于线粒体内膜上，这与前人的报道一致。 3．以苏州青为材料提取基因组DNA，以DNA为模板进行特异引物的PCR扩增，扩增产物经克隆测序、酶切位点分析后用作Southern杂交的探针。用限制性内切酶BamHI、EcoRI、EcoRV、KpnI、XbaI等消化基因组DNA，0.7％琼脂糖凝胶电泳后利用向上毛细管转移法将DNA转移到带正电荷的尼龙膜上。地高辛标记探针，在杂交炉中杂交。EcoRI、EcoRV和XbaI酶切产物出现了一条杂交带，表明GLDH基因在不结球白菜基因组中是单拷贝，这与甜瓜、烟草和甘薯中由单基因编码GLDH的结果一致。