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研究背景肿瘤的免疫治疗在近几年的研究中取得了巨大的进展,目前已经成为肿瘤治疗中最引人注目的方向之一。主要组织相容性抗原复合体(Major histocompatibility complex)主要负责提呈抗原,是生物体免疫系统的重要组成部分。MHCⅠ类分子结合来源于细胞内的内源性抗原肽,可与CD8 T细胞结合从而被识别;而MHCⅡ类分子结合细胞外源性抗原肽,与CD4 T细胞结合从而被识别。MHCⅡ类分子在肿瘤细胞上的表达与肿瘤细胞的存活和免疫治疗的反应强度有关。然而,肿瘤细胞表面MHCⅡ类分子的表达与免疫系统对肿瘤细胞的免疫反应之间的机制尚不明确。与MHCⅠ类和MHCⅡ类分子结合的表位分别被称为CD8 T细胞和CD4 T细胞表位。表位结合到MHC分子是抗原呈递过程的重要步骤,且表位在与MHC分子结合的过程中具有高度的选择性和灵敏性。“狡猾”的肿瘤细胞通过减少其表面MHCⅠ的表达,使表面抗原不能被有效地提呈给CD8 T细胞,因此CD8 T细胞无法发挥杀伤肿瘤的能力。目前通过多种途径促进T细胞的活化是肿瘤免疫治疗研究领域的热点之一,但肿瘤细胞表面MHCⅠ和Ⅱ类分子表达与肿瘤免疫原性的关系没有得到足够的重视。本研究关注提高肿瘤表面MHCⅠ和Ⅱ类分子的表达能否使肿瘤抗原被有效提呈给T细胞进而有效激活抗肿瘤免疫反应。研究目的提高肿瘤细胞表面MHCⅡ类分子或MHCⅠ类分子的表达或使二者的表达共同提高,使肿瘤细胞抗原能够被有效提呈给CD4 T细胞并能够被CD8 T细胞识别,从而有效激活抗肿瘤免疫反应,为相关肿瘤细胞疫苗及抗肿瘤治疗研究提供新的思路。研究方法1.构建插入小鼠H-2Dd cDNA分子的质粒并转染野生型B16黑色素瘤细胞,获得可稳定表达小鼠H-2Dd分子的B16-H-2Dd细胞系。’2.将构建成功的稳定表达小鼠H-2Dd分子的B16-H-2Dd细胞经射线辐照后以不同数量接种于C57BL/6小鼠皮下,一定时间后接种野生型B16细胞构建小鼠黑色素瘤模型,并监测小鼠体重、肿瘤生长。3.应用不同浓度TSA(trichostatinA,去乙酰化酶抑制剂)、azacitidine(DNA甲基转移酶抑制剂)及IFNγ刺激B16细胞,将经过刺激后表达MHCⅠ及MHCⅡ的B16细胞经射线辐照后接种于小鼠皮下,一定时间后皮下接种野生型B16细胞构建小鼠黑色素瘤模型,并监测小鼠体重、肿瘤生长,流式细胞术检测小鼠引流淋巴结及肿瘤组织中各种免疫细胞比例,应用免疫组化技术检测肿瘤组织中各种免疫细胞的分布。研究结果1.构建出可稳定表达小鼠H-2Dd分子的B16-H-2Dd细胞系。2.与接种正常B16细胞组相比,接种稳定表达小鼠H-2Dd分子的B16细胞组未能有效提呈抗原、激活抗肿瘤免疫反应。3.应用azacitidine联合IFN-γ刺激B16细胞后可使细胞表面MHCⅠ及MHCⅡ表达上调。4.表达MHCⅠ及MHCⅡ的B16细胞可有效激活抗肿瘤免疫反应,且肿瘤组织中CD4 T细胞比例升高。研究结论应用azacitidine联合IFNγ能刺激肿瘤细胞表面MHCⅠ及Ⅱ类分子的表达,可促进小鼠黑色素瘤细胞肿瘤抗原的提呈,有效激活了小鼠的抗肿瘤免疫反应,对肿瘤的形成及生长具有一定抑制作用,而提高肿瘤细胞表面同种异基因MHCⅠ类分子的表达对小鼠黑色素瘤细胞的免疫原性没有起到增强作用。