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芪三酚(Resveratrol,Res)是一种非黄酮类多酚化合物,广泛存在于自然界中,是植物在受到外来侵害时所产生的一种抗性物质。目前研究发现芪三酚具有多种生物学效应,具有抗氧化作用、阻滞细胞周期、激活腺苷酸环化酶活性、抑制成肌纤维细胞的增殖等作用。单羧酸转运蛋白MCT(也称BRIT1)和MDC1基因(又称NFBD1基因),都是非常重要的参与DNA损伤应答反应的重要分子,这两种分子都是大蛋白分子,近年来发现他们可能与肿瘤的发生发展有关。本文主要针对Res对乳腺癌生物学行为的影响及其机制进行了初步的研究,并对其与MCT、MDC1之间相互作用关系进行了初步的探索。分述以以下三个部分进行阐述。(1)Res对乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231生物学行为的影响:用不同剂量的Res作用于MCF-7、MDA-MB-231细胞,采用MTS法测定两组乳腺癌细胞的增殖水平;流式细胞仪检测其细胞周期与凋亡;Transwell实验测定其细胞的侵袭能力;划痕实验检测MDA-MB-231细胞的迁移能力;应用吖啶橙荧光染色观察给药后MCF-7细胞的程序性死亡征象;应用质粒转染法观察Res对乳腺癌MCF-7细胞的自噬情况的发生。并用实时定量荧光PCR法和Western blotting检测MCF-7细胞中相关基因的表达。结果发现Res抑制乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞的增殖、周期和侵袭,还能明显地促进乳腺癌MCF-7细胞的凋亡和自噬情况的发生,并能诱导程序性死亡相关基因和蛋白表达量的改变。其机制可能涉及对MMP-2和TIMP-2表达的双向调控,也可能和CyclingB1,Caspase3等的调控有关。(2)MCT基因对乳腺癌MDA-MB-231生物学特性的影响:本部分主要研究单羧酸转运蛋白(MCT)过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响,具体方法:将实验组(真核表达质粒pcDNA3.1/MCT)及阴性对照组(空质粒pcDNA3.1)分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,使用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)和细胞免疫荧光化学法分别检测转染MCT基因的效率。用MTS法检测转染MCT基因后对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时用吖啶橙染色法检测细胞形态学的改变。用流式细胞仪检测MCT基因过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、坏死情况和周期的影响;使用Transwell实验检测转染MCT基因后对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响。其结果发现:MCT基因过表达能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡和坏死,调控细胞周期,同时能抑制细胞的增殖、侵袭和转移能力。(3)探讨Res对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖抑制的相关效应及其与MDC1基因的关系。以人乳腺癌MDA-MB-231细胞株为研究对象,采用MTS方法测定细胞增殖,应用吖啶橙荧光染色观察给药Res后对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响,用RT-PCR与免疫印迹方法测定MDC1基因与蛋白表达水平,用小干扰RNA干扰MDC1基因后,用流式细胞仪检测细胞的凋亡并观察MDC1基因敲降后对药物Res敏感性的影响。其结果表明:40μmol/L以上的Res可以抑制MDA-MB-231细胞的增殖,Res可以有效的降低MDC1基因和蛋白的表达并促进细胞的凋亡。用小RNA干扰MDC1基因(MDC1-Si RNA)后,MDA-MB-231细胞对Res的敏感性增加。