双启动子激活标签法的研究

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水稻(Oryza sativa L.)是世界上最重要的粮食作物之一,阐明基因的生物学功能,是目前水稻功能基因组学所面临的迫切任务。突变体是功能基因组学研究的重要材料。本论文通过对本实验室设计的新型的激活标签获得的突变体进行研究,主要研究结果如下:   1、对转化株当代进行耐盐筛选,在筛选到的80多株耐盐突变体中,发现了一批表型发生明显改变的突变体,如少分蘖突变体、矮而多分蘖突变体、穗发育异常突变体、不育突变体、嵌合叶色突变体等。   2、应用连接介导的PCR技术,得到12个样品中T-DNA的具体位置。其中6个样品T-DNA插入在基因组非编码区域中,5个插入在启动子区域,1个插入在基因内部。   3、以获得的M7,M15号耐盐突变体为材料,通过RT-PCR分析了T-DNA插入位置侧翼序列的转录情况。RT-PCR表明,与野生型水稻“中花11”相比,耐盐突变体中T-DNA的旁侧序列表达水平明显上调,说明强启动子启动了其侧翼序列的表达。   4、对嵌合叶色的耐盐突变体涉及到的腺嘌呤磷酸核糖转移酶2(APRT)基因功能进行了初步研究,水稻pOsAPRTP:GUS-GFP转化株GUS染色结果显示该基因在幼叶中表达较弱而在根,茎中表达较强,并与水稻组织RT-PCR中OsAPRT基因的时空表达模式一致。水稻幼苗经200mMNaCL和200mM甘露醇胁迫处理,随着处理时间的延长,OsAPRT基因表达量明显上调。OsAPRT超表达转化株在NaCL胁迫培养基中并未出现耐盐现象,而在甘露醇胁迫培养基中超表达转化株有耐干旱现象。在普通1/2MS培养基中,抑制转化株出现矮化现象。
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