一、目的子痫前期（Preeclampsia,PE）是妊娠期特有的进展性疾病,以妊娠20周后新发高血压、有或者无蛋白尿伴全身小动脉痉挛、多脏器（肝、肾、胎盘）损伤或衰竭的妊娠并发症。子痫前期的发病与侵袭性滋养层细胞分化异常导致的胎盘发育不良相关,子痫前期的胎盘处于缺氧、代谢紊乱状态,此时葡萄糖消耗异常。GATA6是GATA转录因子家族中的一员,其序列高度保守,有研究报道GATA6可调控胚胎发育,但在生殖系统疾病中的作用尚不明确。本研究旨在探讨转录因子GATA6在子痫前期中糖酵解的改变。我们分析子痫前期胎盘与正常妊娠胎盘组织的GATA6、胎盘生长因子（PLGF）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）、磷酸甘油酸酯激酶1（PGK1）、乳酸脱氢酶A（LDHA）的表达差异;利用滋养层细胞系,检测GATA6在滋养层细胞系HTR-8中的表达与GLUT1、PGK1、LDHA表达的相关性以及糖酵解产物乳酸生成的变化,转染GATA6过表达质粒及干扰片段,调控滋养层细胞系HTR-8的GATA6,检测糖酵解GLUT1及相关酶与产物变化,分析细胞迁移、侵袭、增殖能力变化;构建GATA6低表达类子痫症状模型鼠,检测相关指标及病理改变等情况,逐步揭示GATA6在子痫前期糖酵解中的作用。二、方法1.收集正常妊娠孕妇和PE孕妇的胎盘组织,免疫组化、Western Blot检测GATA6、PLGF的表达。2.免疫组化检测GLUT1、PGK1、LDHA在正常妊娠孕妇和PE孕妇胎盘的表达情况。3.细胞免疫荧光定位GATA6表达位置;Western Blot、q PCR检测HTR-8细胞中下调/上调GATA6后转染效率及GLUT1、PGK1、LDHA的表达及乳酸生成的变化。4.Transwell,CCK8,克隆形成,Western Blot验证下调/上调GATA6后HTR-8细胞的迁移、侵袭、增殖情况。5.Western Blot,q PCR确定下调GLUT1转染效率,细胞免疫荧光确定GLUT1的表达位置;JASPAR数据库预测GATA6与GLUT1的序列结合位点;CO-IP检测GATA6与GLUT1之间的相互作用;细胞免疫荧光检测GATA6与GLUT1的表达情况;STRING数据库预测GLUT1与迁移、侵袭、增殖蛋白的互作网络;Western Blot,Transwell检测GATA6与GLUT1共转染后对HTR-8细胞迁移、侵袭功能的影响。6.确定腺病毒感染孕鼠模型的剂量;检测低表达GATA6孕鼠的血压、蛋白尿变化情况;q PCR检测血液中GATA6的表达;测量模型鼠的胎盘直径、胎盘重量、胎鼠重量的变化;ELISA检测模型鼠血清中PLGF、可溶性血管内皮生长因子受体1（s Flt-1）的表达变化;免疫组化检测模型鼠胎盘中PLGF、VEGFR-1/FLT-1以及GLUT1、PGK1的变化;HE染色、PAS糖原染色检测模型鼠的肾脏损伤和肾脏糖原累积的情况。三、结果1.较正常妊娠胎盘相比,GATA6、PLGF在PE胎盘中低表达。2.较正常妊娠胎盘相比,PE胎盘中的GLUT1、PGK1的表达降低,LDHA表达无统计学差异。3.在HTR-8细胞中,GATA6可以使GLUT1、PGK1、LDHA的蛋白质和m RNA表达增多,乳酸生成增多。4.GATA6可以使HTR-8细胞的迁移、侵袭、增殖能力增强。5.JASPAR数据库预测到GATA6与GLUT1的结合位点;GATA6与GLUT1存在相互作用且可以共表达;下调GLUT1后,HTR-8细胞的迁移、侵袭能力下降,上调GATA6后可部分恢复HTR-8细胞迁移、侵袭能力。6.确定3.5×10~9噬斑形成单位为腺病毒构建模型鼠的感染剂量;与Ad-CTL（对照）组相比,Ad-GATA6（GATA6低表达）组孕鼠出现明显的高血压及蛋白尿的情况,其血清中GATA6表达降低、s Flt-1/PLGF的比值升高,且胎盘直径、重量减少。Ad-GATA6模型鼠D18胎盘中GATA6、PLGF、GLUT1、PGK1低表达,VEGFR-1/FLT-1高表达,肾脏并未出现明显病理改变和明显的糖原累积。四、结论1.PE患者胎盘组织中GATA6、PLGF、GLUT1以及PGK1表达降低。2.GATA6增强了滋养层细胞系HTR-8的细胞功能,且可使GLUT1、PGK1、LDHA的表达、乳酸生成增多。3.GATA6可通过调控GLUT1的表达进而影响HTR-8细胞迁移、侵袭等能力的变化。4.构建GATA6低表达模型鼠,发现低表达GATA6组孕鼠的血压、蛋白尿、胎盘等出现了类子痫前期的症状表现,血清中GATA6表达降低和s Flt-1/PLGF的比值升高,并检测到GLUT1、PGK1出现低表达的情况,但是病理改变并未累及到肾脏。