【摘 要】
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目的:建立一种用于研究肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）侵袭转移的实验动物模型,并检测转移模型转移灶中HCC肿瘤标志物、上皮间质转化标志物以及癌巢周围淋巴细胞的表达情况,进一步探究转移性HCC的肿瘤微环境变化。方法:（1）HCC转移动物模型的构建:培养Hep G2细胞,调整Hep G2细胞浓度为2×10~7个/m L;将购置的20只BALB/c-nu小鼠随机分为实
【基金项目】
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遵市科合社字（2018）42号；
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目的:建立一种用于研究肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）侵袭转移的实验动物模型,并检测转移模型转移灶中HCC肿瘤标志物、上皮间质转化标志物以及癌巢周围淋巴细胞的表达情况,进一步探究转移性HCC的肿瘤微环境变化。方法:（1）HCC转移动物模型的构建:培养Hep G2细胞,调整Hep G2细胞浓度为2×10~7个/m L;将购置的20只BALB/c-nu小鼠随机分为实验组和对照组,每组10只,实验组尾静脉注射Hep G2细胞悬液0.2m L（2×10~7个/m L）,对照组尾静脉注射等量生理盐水,实验期间定期称重,定期观察小鼠活动状态、精神情况、饮食情况、皮肤色泽、体质状况。（2）HE染色:处死小鼠,对HCC常见转移器官和成瘤组织取材进行HE染色观察HCC的转移情况,并分析肝癌细胞生长分布特点及侵袭迁移能力。（3）免疫组化:检测肿瘤组织及转移器官组织中甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein,AFP）、精氨酸酶-1（Arginase-1,Arg-1）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（Glypican-3,GPC-3）、肝细胞石蜡抗原-1（Hepatocyte paraffin-1,Hep Par-1）、上皮型钙粘蛋白（Epithelial cadherin,E-cadherin）、神经型钙粘蛋白（Neural cadherin,N-cadherin）的表达情况,并检测转移灶癌巢周围CD4+T淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞、CD20+B淋巴细胞、白介素-2（Interleukin-2,IL-2）的表达情况。（4）镜下观察:癌巢周围淋巴细胞浸润情况。（5）统计学分析:采用SPSS 18.0统计学软件对所得数据进行分析。结果:（1）成功建立了HCC血行转移动物模型:实验组小鼠注射肿瘤细胞过程中因注射过快导致1只小鼠死亡,造模存活率为90%,成瘤率为89%,Hep G2细胞可通过尾静脉转移至肝、肺、脾、肾、肾上腺以及侵犯骨骼和腹壁,肝脏转移率为44%、肺脏转移率为78%、肾脏转移率为11%、肾上腺转移率为33%、脾脏转移率为22%。（2）HE染色结果:肝内有大片癌巢,癌细胞大小不一,形态各异,细胞异型性极其明显,病理性核分裂像多见,癌细胞排列成巢状,间质中含大量淋巴细胞浸润。（3）免疫组化结果:在HCC转移模型的转移灶中AFP、Arg-1、GPC-3、Hep Par-1均有表达,但阳性率各不相同,AFP强阳性率为33%,Arg-1强阳性率为89%,GPC-3强阳性率为78%,Hep Par-1强阳性率为89%;在HCC转移组织中N-cadherin为弱阳性表达,E-cadherin为阴性表达;在HCC转移组织的癌巢周围淋巴细胞中CD20+B淋巴细胞和IL-2均为阳性表达,CD4+T淋巴细胞为弱阳性表达,CD8+T淋巴细胞为阴性表达。结论:（1）AFP、Arg-1、GPC-3、Hep Par-1在HCC转移灶中的表达情况提示多指标联合对于HCC的诊断有一定的临床参考价值。（2）证实了肿瘤微环境的变化是影响HCC侵袭转移的重要因素。
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