目的:探索小分子干扰RNA对小鼠子宫平滑肌细胞中神经介素B受体(NMBR)基因表达的影响,为NMBR后续研究提供工具。方法:采用分娩期小鼠子宫平滑肌细胞进行原代培养,并通过免疫细胞化学及免疫荧光方法进行鉴定;采用免疫细胞化学法及实时定量荧光PCR对小鼠子宫平滑肌细胞转染前后NMBR基因及蛋白表达进行测定,并进行细胞毒性检测。结果:1.原代细胞培养:妊娠期小鼠子宫平滑肌细胞经原代培养生长状态良好,呈典型长梭形,经免疫细胞化学及免疫荧光证实富含α—肌动蛋白。2.siRNA有效干扰片段筛选、确定:1)转染效率:所有细胞均被成功传染,即RNAi转染效率达90%以上,可满足实验需要;2)细胞毒性实验:结果显示3条RNAi作用时间为24h-72h之间,对细胞有一定毒性作用,干预1组、干预2组细胞在72h时段均存活细胞百分比维持在80%以上,可满足实验需要;3)干扰效果:结果显示三个干预组的基因表达的抑制率分别为59.4%,94.2%,92.8%。4)有效siRNA确定:对细胞毒性最小且有明显干预作用的RNAi为干预2组(RNAi-987),其RNAi序列为NMBR-987Sense:5-GCUUUAGGAAGCACUUCAATT-3Anti-sense:5-UUGAAGUGCUUCCUAAAGCTT-3结论:特异性的SiRNA可有效降低小鼠子宫平滑肌细胞中NMBR表达,为NMBR的后续研究提供实验基础。