论文部分内容阅读
目的1)检验前庭膜性迷路对腺病毒载体的通透性,从而探索在外淋巴中直接给腺病毒载体对于内耳毛细胞再生研究的可行性。2)新生鼠的耳蜗上皮转染math1产生异位新生的毛细胞,本实验为了解前庭上皮细胞是否存在同样的具有分化潜能的感觉上皮。3)探索math1诱导的毛细胞样的细胞的转分化的形态学过程及分化条件、特点。方法Ad-math1-EGFP载体的构建及其转染前庭上皮后表达的math1蛋白的检测；本实验以鼠为研究对象,以中路窝途径快速采集标本,分别建立前庭膜迷路整体培养和前庭终器培养的模型,并检验两个不同模型转染Ad-math1-EGFP载体后的效应；采用前庭终器培养的模型,使正常培养的前庭上皮感染Ad-math1-EGFP,对转染病毒后不同时间点的标本固定,部分采取冰冻切片,运用免疫组织化学进行染色后观察、采集实验数据；采用前庭终器培养,并建立高、低增殖活性的前庭感觉上皮的模型,分别将它们转染Ad-math1-EGFP,一定时间后固定、免疫组织化学染色后观察、采集实验数据；本实验以莱卡荧光显微镜、SP2或者SP5的共聚焦显微镜对标本进行观察并采集实验数据。结果1)体外培养,膜迷路整体模型和前庭终器培养模型的首次建立。前者,尽量保持前庭膜迷路的完整性并将它们贴壁培养,培养液中给腺病毒载体,模拟在体时外淋巴给病毒；后者,去除前庭的膜性非感觉上皮并将剩余的感觉上皮贴壁培养,培养液中给腺病毒载体,模拟在体时内淋巴给病毒。2)膜迷路整体培养模式,培养液中给Ad-math1-EGFP载体,上皮细胞在非感觉上皮区出现极少量毛细胞样的细胞；前庭终器培养模式,培养液中给Ad-math1-EGFP载体,非感觉上皮区有大量的方格状细胞出现,并在此处出现大量的毛细胞样的细胞。3)异位新生的毛细胞样的细胞具有纤毛,多成簇出现,部分细胞共用一簇纤毛；细胞形态多样,呈现为多边形态、毛细胞样的形态及兼有二者特点的柱状。4)机械损伤的前庭终器,在损伤处的支持细胞增殖且在math1诱导下出现新生的毛细胞样的细胞；正常培养的前庭终器感觉上皮区极少数增殖细胞且在math1诱导下未见新生的毛细胞样的细胞；庆大霉素造模后前庭终器感觉上皮区几乎没有增殖细胞且在math1诱导下未见新生的毛细胞样的细胞5)Math1诱导的新生毛细胞样的细胞多来源于一些高增殖活性、方格状的细胞,其分化的过程中多不经历细胞的增殖,但分裂中的细胞有可能被转染并具备毛细胞的特点。结论1)前庭膜性迷路是阻止腺病毒载体从外淋巴进入内淋巴的屏障。2)新生鼠的前庭上皮中存在一类高增殖活性的细胞,贴壁培养时,它们可以迁延、增殖,并在math1诱导下可转分化为异位的毛细胞样细胞。3)具有高增殖潜能的前体细胞转染math1后易产生毛细胞样的细胞。4)math1诱导的毛细胞样的细胞的过程是一个不依赖于细胞增殖的转分化的过程。5)毛细胞样的细胞形态多样,并具备其行使功能的基本结构静纤毛。