理气活血清热方及各拆方抑制人胃腺癌细胞BGC823 PDGFRβ-PLC-γ1信号转导的研究

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目的:通过观察理气活血清热方(W)及各拆方(黄连Q,木香、八月札L,当归、水红花子H,黄连,木香、八月札QL,黄连、当归、水红花子QH,木香、八月札、当归、水红花子LH)对胃腺癌细胞BGC823增殖抑制和PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα信号转导通路的影响,研究清热、理气、活血法治疗胃腺癌的机理,探讨热毒、气滞及瘀血与胃腺癌病变和PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα信号转导的关系。方法:采用人胃腺癌细胞BGC823为实验对象,用倒置显微镜观察细胞生长情况,并计算细胞抑制率,筛选出有效的药物;用正交试验优选出疗效最好的方剂;设对照组和用清热理气活血全方及其六个拆方处理细胞,在倒置显微镜下观察BGC823细胞生长及形态改变,用Westernblot检测BGC823细胞PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα信号转导通路各蛋白表达的影响。结果:①理气活血清热方及各拆方对BGC823细胞增殖明显抑制,对细胞形态作用明显不同,清热组细胞可见细胞皱缩,透光度减小,形态不规则,细胞间基质呈现丝网状,贴壁性变差;理气组细胞表面逐渐粗糙,继而胞质内充满多量颗粒状物质,然后出现空泡样变化;活血组细胞疏松,呈团状,细胞间隙加大,胞质粗糙;全方组及其它拆方组细胞形态与清热组、活血组相似,培养基中可见有较多的细胞碎片。②清热理气活血全方及各拆方均能抑制BGC823细胞生长,全方作用最强,随药物浓度的增加,对细胞生长抑制呈现剂量—效应依赖关系。③人胃腺癌BGC823细胞可检测到PDGFRβ、PLC-γ1、PKCα蛋白分子的过度表达。④当用IC50药物剂量处理细胞时,理气活血清热全方及各拆方均能抑制PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα信号通路各蛋白表达水平,其作用强弱依次为W>LH>QH>QL>H>L>Q。结论:①清热理气活血全方及各拆方均能明显抑制人胃腺癌细胞BGC823的生长,全方组效果最好,理气、活血、清热三法联用具有协同作用。②胃腺癌发病和PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα转导通路信号增强密切相关。③清热理气活血全方及各拆方均能下调BGC823细胞PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα信号通路各蛋白表达水平,理气、活血、清热及合方抑制胃腺癌细胞增殖与抑制PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα信号转导相关。④通过药效反证,在胃腺癌病变中,热毒、气滞、瘀血与PDGFRβ-PLC-γ1-PKCα信号表达和转导增强密切相关。⑤理气活血清热是治疗胃癌的重要方法。
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