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红景天为景天科红景天属(RhodiolaL.)多年生草本或亚灌木植物。其主要分布于东亚、中亚、西伯利亚以及北美地区,在我国主要分布于西北、西南、东北及华北部分地区。近年来大量文献报道红景天具有抗缺氧功效,但主要都是报道有关红景天提取物的作用功效,并未对其抗缺氧活性成分进行深入研究。因此,本论文研究了红景天抗缺氧作用的有效成分,并初步探讨了其作用机理。
首先,我们利用有机溶剂萃取法和现代色谱技术,如正、反相硅胶柱层析,薄层层析,大孔吸附树脂柱层析等对红景天的化学成分进行研究,从中分离得到2个单体化合物,经HPLC分析其纯度都不低于98.0﹪;然后利用现代光谱(NMR,MS,IR,UV)鉴定为红景天苷(Salidroside)和络塞维(Rosavine)。这是首次报道了利用反相C-18硅胶柱层析纯化得到高纯度的络塞维(Rosavine)。
其次,通过对PC12神经细胞的体外培养,利用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)建立体外缺氧/复氧损伤的实验模型,考察红景天苷和络塞维对缺氧/复氧损伤的保护作用,并对其作用机理进行了初步的探讨。缺氧/复氧是临床常见的征象之一,可导致人体出现一系列生理功能变化,如呼吸、循环和脑功能的改变,严重时甚至可以危及人们的生命。PC12神经细胞为大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤,广泛作为研究神经细胞分化、离子通道、受体和递质释放的实验材料。连二亚硫酸钠(Na2S2O4)是一种普通的耗氧剂,能迅速清除融入培养基中的氧,并不会损伤细胞膜,现已广泛用于细胞缺氧模型的建立。
研究结果表明,络塞维对PC12细胞缺氧/复氧损伤没有保护作用;而红景天苷则表现出明显的保护作用。具体表现为当红景天苷作用浓度在0~100μg/ml范围内能明显减轻缺氧/复氧损伤细胞形态学变化;与正常细胞组相比,缺氧/复氧损伤后,细胞存活率为41.8±5.7﹪,乳酸脱氢酶(LDH)释放率为513.5﹪±5.5﹪,经12.5,50,100μg/ml红景天苷作用后,细胞存活率明显提高,分别为53.8±2.7﹪,62.8±4.1﹪,92.2±3.7﹪,LDH释放率显著下降,分别为382.4﹪±3.1﹪,282.4﹪±5.6﹪,258.1﹪±6.3﹪;此外,红景天苷还能显著改变缺氧/复氧损伤细胞的凋亡率,当其作用浓度为0,12.5,50,100μg/ml时,相应的细胞凋亡率为17.0±1.2﹪,9.5±0.9﹪,7.4±0.5﹪和4.5±0.4﹪。这些结果提示红景天提取物具有的缺氧保护作用,可能主要是由于红景天苷的作用,红景天苷是红景天抗缺氧主要活性成分。因此,红景天苷活性单体成分可能用于开发防治与缺氧/复氧有关的神经性疾病的药物。