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大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）能引起人类、哺乳动物等广泛宿主的腹泻,一些毒力、传播力和耐药性强的菌株给公共卫生及畜牧生产造成了巨大的威胁。为掌握四川主要家兔规模化养殖区兔大肠杆菌腹泻相关毒力基因的流行情况,清楚大肠杆菌分子流行特征,对大肠杆菌进行毒力基因的分布调查和分子分型研究。20152017年间从四川部分地区（成都、德阳、雅安、自贡、绵阳）养殖场采集腹泻家兔肛门拭子样本,经麦康凯（MAC）、伊红美蓝（EMB）选择培养基、形态学及特异性PCR鉴定获得兔源大肠杆菌。随后,对涉及肠毒素（Enterotoxin）、志贺毒素（Shiga-toxin,Stx）、菌毛粘附素（Fimbrial adhesins）、侵袭因子（Invasive factors）、肠聚集性大肠杆菌（Enteroaggregative Escherichia coli,EAEC）和毒力岛（Pathogenicity island,PAI）等类别的17种毒力基因进行PCR检测,通过Fisher精确检验,对分离株的毒力基因分布情况进行比较。采用多位点序列分型（MLST）对分离株进行7个管家基因的扩增和测序后,在Warwick数据库比对获取序列型,再采用MAGA 6.0、SplitsTree4软件基于管家基因构建系统发育树,分析各序列型的亲缘关系;另外,用DnaSP6软件进行管家基因的核苷酸多态性分析。采用美国疾控中心PulseNet的脉冲场凝胶电泳（PFGE）方案,用Quantity One软件进行基因分型。最后,综合分析MLST和PFGE分型结果与毒力基因检出情况之间的关联性。结果从腹泻家兔病例中共分离、鉴定39株大肠杆菌,对其进行的17种毒力基因检测发现携带6种毒力基因,分别为肠细胞脱落位点（LEE）毒力岛eae（41.0%）、ler（41.0%）;兔菌毛粘附素ral（33.3%）、afr2（10.3%）;耶尔森菌强毒力岛（HPI）irp2（15.4%）;肠毒素astA（7.7%）,其余11种毒力基因（aggR、aap、aaf、aggA、IpaH、STa、STb、LT、stx1、stx2、afr1）均未检出。39株大肠杆菌中24株至少拥有一种或多种与腹泻相关的毒力基因,共有6种毒力基因组合:eae-ler-ral（50%）、eae-ler-afr2（13%）、eae-ler-afr2-ral（4%）、irp2（21%）、astA（8%）和astA-irp2（4%）。统计学分析发现成都、德阳两地20152016年与2017年的毒力分布有显著差异,20152016年间成都、德阳、雅安、自贡、绵阳5个地区的毒力分布有显著差异。MLST将39株大肠杆菌分为17个序列型,U328（8株）、ST162（6株）、ST328（4株）、ST380（3株）、ST20（3株）为主要的序列型,管家基因序列的遗传进化分析显示U328和ST328亲缘关系很近。7个管家基因序列核苷酸多态性（Pi）范围为0.00342（purA）0.01374（fumC/icd）。PFEG将39株大肠杆菌分成21个型,菌株总体表现为较高多样性,但在部分区域基因型也较为单一。PFGE分型-MLST-毒力基因综合分析表明:MLST与PFGE分型结果有较高的一致性,PFGE的分辨率略高于MLST。本研究表明四川省5个地区39株腹泻家兔大肠杆菌具有较高的多样性,但在部分养殖区域存在大肠杆菌基因型较为单一的情况;毒力基因研究表明,调查区域的家兔大肠杆菌毒力基因谱存在时空差异且eae、ler、ral和afr2等毒力基因与MLST序列型有较密切的相关性。