【摘 要】
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论文对本实验室鉴定的DPV UL48基因(GenBank登录号EU195110)开展了以下研究:DPV UL48基因的生物信息学分析、原核表达及抗体制备,所得实验结果如下:
1.DPV ULA8基因序列
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论文对本实验室鉴定的DPV UL48基因(GenBank登录号EU195110)开展了以下研究:DPV UL48基因的生物信息学分析、原核表达及抗体制备,所得实验结果如下:
1.DPV ULA8基因序列的生物信息学分析
DPV UL48大小为1425bp,编码474aa。密码子偏爱性分析表明其与酵母的密码子偏爱性较为接近。DPV UL48基因编码的蛋白质不含信号肽,没有跨膜区,抗原性分析结果表明该蛋白的抗原位点分散于整个基因。进化树分析表明DPV UL48基因编码蛋白VP16与人疱疹病毒1型/2型、牛疱疹病毒、猪疱疹病毒同源性较高,但为独立分枝。
2.DPV UL48基因的克隆和原核表达
通过构建pET32-UL48重组原核表达载体,利用IPTG进行诱导表达,得到大小约为78 KD的重组融合蛋白,表达蛋白主要以包涵体的形式存在。最佳表达优化条件为37℃下诱导4h。Western-Blotting实验表明该原核表达蛋白与兔抗鸭瘟病毒血清有较好的反应原性。
3.DPV-UL48多克隆抗体的制备
将纯化的DPV UL48蛋白免疫家兔,获得DPV-UL48的多克隆抗体,该多克隆抗体的琼扩效价为1:8。
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